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細胞死を引き起こすDNA二本鎖切断酵素遺伝子を標的とする化学療法剤の開発

开发针对导致细胞死亡的 DNA 双链断裂酶基因的化疗药物

基本信息

批准号：
06282240
负责人：
綿矢有佑
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はDNA合成の前駆体であるデオキシリボヌクレオシド三リン酸(dNTPと略す)の細胞内プールが不均衡となると、DNA二本鎖切断、及びそれに伴う細胞死(apoptosis)が起こることを明らかにした。さらに、細胞内dNTPプールの不均衡時にDNA二本鎖切断を誘導する酵素(endonucleas)の出現を見い出し、細胞のlysateからこの酵素をSDS-PAGEでsingle band(40kDa)になるまで精製した。このendonucleaseの至適pHは6.0〜6.5であり、DNA二本鎖切断活性の発現に二価金属イオンを要求せず、二価金属イオンによってその活性がむしろ抑制された。この酵素はZn^<2+>によって著しく阻害され、二価金属イオン非依存的DNA二本鎖切断活性を有する新規なendonucleasである事が分かった。さらに、このDNA二本鎖切断酵素をFM3A細胞の核に作用させると、核のDNAはapoptosisの特徴である約180bpごとのnucleosome単位のladder状に断片化された。このDNA切断の5′末端にはリン酸基があり、酵素活性はnuclease inhibitor(anrintricarboxylic acid)により抑制された。この酵素をSDS-PAGEで分画しゲルより回収した。本酵素のN-末端はブロックされていたのでlysyl endopeptidaseで限定分解した後HPLCでペプチドを分離し、現在、それぞれのアミノ酸配列の解析を行っている。我々は人為的にこの酵素を誘導することができれば細胞を死へ導く事ができると考え、本酵素の遺伝子の発現抑制機構を標的とする制がん剤の開発を目的として研究を遂行している。

The intracellular disequilibrium of DNA synthesis precursors, DNA double lock cleavage, and apoptosis are all caused by DNA synthesis precursors. In addition, when the intracellular dNTP concentration is not balanced, the enzyme (endonucleas) induced by DNA double lock cleavage can be seen in the middle of the cell, band the enzyme (lysozyme) induced by SDS-PAGE can be purified by SDS-PAGE. The optimum pH of this endonuclease is 6.0 ~ 6.5, and the activity of DNA two-element cleavage is inhibited by the requirement of di-metal ion. This enzyme is due to the unique ability of Zn^<2+> to inhibit DNA binding and has new endonucleas that have dimetal-independent DNA binding activity. The DNA duplex cleavage enzyme acts on the nucleus of FM3A cells. The characteristics of the DNA duplex apoptosis are about 180bp. The ladder-like fragment of the nucleosome unit is transformed. The 5′ terminal of DNA cleavage is inhibited by an enzyme inhibitor(anrintricarboxylic acid). SDS-PAGE analysis of these enzymes The N-terminal end of the enzyme is cleaved by lysyl endopeptide, and then separated by HPLC. We aim to conduct research on the development of artificial enzymes, including the induction of enzymes in human cells and the inhibition of the production of enzymes.