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サラホトキシン遺伝子の構造解析と前駆体タンパクの発現

萨拉弗毒素基因结构分析及前体蛋白表达

基本信息

批准号：
01580147
负责人：
高崎親久
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

イスラエルのヘビ、Atractaspis engaddensis毒腺からmRNAを抽出し、対応するcDNAライブラリ-(8×10^4プラ-ク)を作成したが、サラホトキシンのアミノ酸配列に基き作成した26mer合成プロ-ブとハイブリするプラ-クはなかった。挿入されたCDNAの長さが概して短かったことから、イスラエルから毒腺空輸する途中で無視できない程のmRNAの分解が起こり、コ-ド領域から3'末端のポリA配列までを含む長いmRNAが消失してしまったためと考えられる。そこで実験の主眼をペプチド合成や化学修飾により、サラホトキシンの種々の誘導体を調製し、その性質の比較から構造・活性相関を論ずることに切り替えた。その結果、C末端Trp残基は心臓毒性、血管収縮活性及びエンドセリン受容体への結合能にとって極めて重要であり、Trp欠失ペプチドには上記いずれの活性も殆ど残存しないこと、13位Tyr残基は血管収縮活性にはある程度関与するが、毒性及び受容体結合能にはさほど関与しないこと、2位Ser、4位Lys、6位Met残基はいずれの活性にもあまり関与しないが、N末α-アミノ基と9位Lys残基は各活性に重要であることがわかった。現在、9位Lys残基の役割を解明すべく9位置換体サラホトキシンを合成中である。又、4位Lys残基が活性に重要でないことを利用して、そのビオチン化誘導体を合成し、ビオチン-アビジン結合を介して樹脂に結合させたアフィニティ-カラムを調製し、受容体精製への応用を検討中である。

The cDNA sequence of Atractaspis engadensis mRNA was extracted, and the cDNA sequence of Atractaspis engadensis mRNA (8 × 10^4) was synthesized. The length of CDNA is short, the length The main purpose of this study is to investigate the synthesis, chemical modification, and properties of the inducers. The results showed that the C-terminal Trp residue was extremely important for cardiotoxicity, vasoconstrictive activity and receptor-binding energy. The Trp residue was deficient in cardiotoxicity, vasoconstrictive activity and receptor-binding energy. The Tyr residue at position 13 was highly relevant for vasoconstrictive activity. The Met residue at position 6 is important for each activity. Now, the 9-position Lys residue is clearly understood and the 9-position Lys residue is synthesized. In addition, the Lys residue at position 4 plays an important role in the synthesis, synthesis and purification of the inducer.