ミトコンドリアF_1F_0ーATPase活性調節サブユニットの作用機作一変異導入による調節サブユニットの機能解析

线粒体F_1F_0 - ATP酶活性调节亚基的作用机制 - 通过突变引入进行调节亚基的功能分析

• 批准号: 01580161
• 负责人: 橋本 忠雄
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01580161/
• 关键词: 酸化的りん酸化反応; F_1iF_OーATPase; 活性調節因子; ATPaseインヒビタ-; 9K蛋白; 15K蛋白

1.調節サブユニット欠失変異株酵母の作成すでにATPaseインヒビタ-、9K蛋白を欠失した変異株酵母を作成しているので、本研究ではさらに15K蛋白を欠失した酵母の作成をめざした。15K蛋白をコ-ドする遺伝子をクロ-ニングし、同遺伝子の中にヒスチジン合成酵素遺伝子を導入し、相同組換により15K遺伝子の欠失した酵母を作成した。同蛋白の欠失はウエスタンブロット法およびHPLC分析により確認した。2.各調節サブユニット欠失酵母、およびミトコンドリアの性質ATPaseインヒビタ-、9K蛋白および15K蛋白のいずれを欠失した酵母を作成しても、それぞれの酵母は非発酵性糖源(グリセロ-ル等)を利用して成育できた。また各変異株酵母より分離したミトコンドリアは正常のミトコンドリアと同じ速度でATPを合成した。これらのことは三調節因子いずれもATP合成には直接関与していないことを示している。しかしATPaseインヒビタ-を欠失したミトコンドリアはATP分解反応においては他のミトコンドリアとは異る性質を示した。即ち、ミトコンドリア膜ポテンシヤルの存在するあいだはいずれのミトコンドリアにおいてもATPを合成し、ATP分解は行わないが、ミトコンドリアの膜ポテンシャルが低下、消失した時には、ATPaseインヒビタ-を欠失したミトコンドリアのみにおいて強いATP分解が観察された。15K、9K蛋白を欠失した場合には若干のATP分解が起きたが一過性であった。これらのことはミトコンドリアの膜ポテンシャルに対応したATPaseインヒビタ-のF_1F_0ーATPaseへの結合・解離機構があることを示し、ATPaseインヒビタ-は膜ポテンシャルが低下した時F_1iF_OーATPaseに結合し、ATPの無駄な水解を防いでいることが明らかになった。

1. In this study, the production of ATPase and 9K protein in mutant yeast was studied. 15K protein gene transfer, gene transfer, enzyme transfer and yeast production The protein was identified by HPLC analysis. 2. The regulation of the properties of yeast, enzyme and protein in the enzyme, 9K protein and 15K protein in the enzyme, yeast and other non-fermentative sugar sources (such as enzyme and protein) in the enzyme. Each mutant yeast is isolated from the normal yeast and synthesized at the same rate. The three regulatory factors are directly related to ATP synthesis. The enzyme activity is very high, and the enzyme activity is very low. That is to say, the existence of ATP and ATP in the membrane of the enzyme in the middle of the cell is different from that of ATP in the middle of the cell, ATP in the middle of the cell is different from that of ATP in the cell, ATP in the cell is different from ATP in the cell, ATP in the cell is different from ATP in the cell, ATP in the cell is different from ATP in the cell. 15K, 9K protein deficiency, some ATP decomposition, In this case, the binding mechanism of F_1F_0-ATPase and ATP free hydrolysis is discussed.

项目成果

Tadao Hashimoto,Yukio Yoshida and Kunio Tagawa: "Regulatory proteins of F_1F_0ーATPase ーRole of ATPase inhibitorー" J.Bioenerg Biomembr. 22. 27-38 (1990)

Tadao Hashimoto、Yukio Yoshida 和 Kunio Takawa：“F_1F_0 的调节蛋白－ATPase －ATPase 抑制剂的作用－”J.Bioenerg Biomembr. 22. 27-38 (1990)

Naoki Ichikawa,Yukio Yoshida,Tadao Hashimoto,Naoki Ogasawara,Hroshi Yoshikawa,Fumio Imamoto and Kunio Tagawa: "Activation of ATP Hydrolysis by an Uncoupler in Mutant Mitochondria Lacking an Intinsic ATPase Inhibitor in Yeast" J.Biol Chom.265. (1990)

Naoki Ichikawa、Yukio Yoshida、Tadao Hashimoto、Naoki Ogasawara、Hroshi Yoshikawa、Fumio Imamoto 和 Kunio Takawa：“酵母中缺乏内在 ATP 酶抑制剂的突变线粒体中解偶联剂对 ATP 水解的激活”J.Biol Chom.265。

Yukuo Yoshida,Takeya Sato,Tadao Hashimoto,Naoki Ichikawa,Kunio Tagawa: "Isolation of A gene for A Regulatory Subnit,15K protein,of Mitochondrial F_1F_0ーATPase and Construction of Mutant Yeast Lacking the protein" Eur.J.Biochem.

Yukuo Yoshida、Takeya Sato、Tadao Hashimoto、Naoki Ichikawa、Kunio Takawa：“线粒体 F_1F_0ーATP 酶调节亚基、15K 蛋白的 A 基因的分离以及缺乏该蛋白的突变酵母的构建”Eur.J.Biochem。

Tadao Hashimot,Yukuo Yoshida and Kunio Tagawa: "Simultaneous Brindings of ATPase Inhibitor and 9K protein to F_1F_0ーATPase by the Aid of 15K Protein in Yeast" J.Biochem.

Tadao Hashimot、Yukuo Yoshida 和 Kunio Takawa：“在酵母中借助 15K 蛋白同时将 ATP 酶抑制剂和 9K 蛋白结合到 F_1F_0ーATP 酶”J.Biochem。

Tadao Hashimoto,Hiroshi Mimura,Yukuo Yoshida,Naoki Ichikawa and Kunio Tagawa: "Biaenergetics: Molecular Biology,Biochemistry and pathology" Plenum Publishing Co.,New York(C.H.Kim and T.Ozawa eds), 300 (1990)

Tadao Hashimoto、Hiroshi Mimura、Yukuo Yoshida、Naoki Ichikawa 和 Kunio Takawa：“Biaenergetics：分子生物学、生物化学和病理学”Plenum Publishing Co.，纽约（C.H.Kim 和 T.Ozawa 编辑），300（1990）