細胞性因子によるウイルス遺伝子の転写と複製の調節機構の解析

细胞因子对病毒基因转录和复制的调控机制分析

• 批准号: 01580186
• 负责人: 中西 義信
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01580186/
• 关键词: 腫瘍ウイルス; 転写制御; 無細胞転写反応; DNA結合蛋白質

この研究ではNF-1と呼ばれる細胞性のタンパクによるヒトアデノウイルス遺伝子の転写と複製の調節機構を解析した。その結果以下に述べるいくつかの新しい知見が得られた。しかしながらNF-1を完全に精製するには至らなかったため、当初の計画にある精製したタンパクを用いた実験を行うことはできなかった。1.アデノウイルスの癌遺伝子産物であるE1AタンパクがNF-1のDNA結合性を低下させることが示唆された。そしてその働きは発癌性の強いアデノウイルスのE1Aタンパクで特に顕著であると思われた。これはE1AタンパクがNF-1を修飾するか、あるいは両タンパクが結合することにより引き起こされると予想される。2.NF-1のDNA結合活性は、NF-1結合部位近傍に結合する別の因子の存在により阻害されることが分かった。両因子が結合することにより互いにタ-ゲットDNAへの結合を阻害しあうと考えられた。3.DNAアフィニティ-カラム等を利用してエ-ルリッヒ腹水癌細胞の核抽出液からNF-1様因子を部分精製した。精製を進めると分子量約8万および5万ダルトンの2種類のタンパクが濃縮されてくることにより、このいずれかのタンパクがNF-1と同一のDNA結合活性を担っていると考えられた。以上の結果はE1AタンパクがNF-1活性を阻害することにより、自己遺伝子の転写とウイルスゲノムの複製を低下させることを示唆する。これはアデノウイルスの感染をきっかけとした生体組織の癌化におけるE1Aタンパクの働きを理解するうえできわめて重要な知見であると思われる。今後精製したタンパクを用いて両者の相互作用を解析することが重要である。

This study analyzes the regulatory mechanisms of NF-1 and cellular DNA replication. The results are described below. The original plan was to refine the equipment. 1. DNA binding of NF-1 was decreased by E1A protein. The first time I saw him, I was thinking about him. E1A is the most important component of NF-1. 2. NF-1 DNA binding activity is inhibited by the presence of other factors near NF-1 binding site. The combination of the two factors is not easy. 3. The NF-1 factor in the nuclear extract of ascites cancer cells was partially purified by DNA sequencing. The molecular weight of the purified protein is about 80,000 to 50,000. The two kinds of protein are concentrated and the same DNA binding activity is studied. These results indicate that NF-1 activity is inhibited by E1A, and that the replication of NF-1 is reduced by the replication of NF-1. This is the first time I've ever seen an infection in A living organism. From now on, the interaction between the two parties will be analyzed.

项目成果

Y.Nakanishi: "Interactions of factors bound at two different sites in the 5'upstream region of the adenovirus 12 E1A gene" Biochemical and Biophysical Research Communications. 158. 685-689 (1989)

Y.Nakanishi：“腺病毒 12 E1A 基因 5 上游区域两个不同位点结合的因子的相互作用”生物化学和生物物理研究通讯。

H.Shibata: "Cis-and trans-acting factors for transcription of the adenovirus 12 E1A gene" Biochimica et Biophysica Acta. 1C07. 184-191 (1989)

H.Shibata：“腺病毒 12 E1A 基因转录的顺式和反式作用因子”Biochimica et Biophysicala Acta。

S.Koikeda: "Nuclear factor I stimulates transcription of the adenovirus12 E1A gene in a cell-free system" Biochimica et Biophysica Acta. 1048. 85-92 (1990)

S.Koikeda：“核因子 I 刺激无细胞系统中腺病毒 12 E1A 基因的转录”Biochimica et Biophysicala Acta。