卵巣の冷蔵およびガラス化凍結による未成熟卵母細胞の保存

通过卵巢冷藏和玻璃化冷冻保存未成熟卵母细胞

• 批准号: 02806051
• 负责人: 葛西 孫三郎
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02806051/
• 关键词: 卵巣; 冷蔵保存; ガラス化; 卵母細胞; 蔗糖

1.基礎保存液組成の検討:マウス桑実胚を0℃に保存する場合、蔗糖(0.75M)の添加が有効であることが知られている。生存性の判定の容易なマウス2細胞期胚〜桑実胚を用いて,適する冷蔵保存液の組成を検討した結果、(1)蔗糖の適濃度は発育段階により異なる、(2)発育段階の初期の胚の方が保存可能期間が短い、(3)保存液のpHは中性〜弱アルカリ性が適している、(4)保存液の緩衡系は、リン酸塩(PB1液)、重炭酸塩(KRB液)に比べ、HEPES(M2)が適している、ことが明らかとなった。2.マウス卵巣の冷蔵保存:PMSG注射後48時間目のICR系雌マウスから卵巣を取り出し、0℃のM2液に保存したのち卵胞卵を採取して培養し、正常形態率およびMetaphaseIIへの成熟率をしらべた。その結果、(1)1時間保存しても生存性は低下せず、低温に対する感受性は認められなかった。(2)保存液への蔗糖の添加は、0.5〜1.0M区で効果が認められた。(3)しかし、保存期間と共に生存率は低下し、48時間後の正常形態卵率は48%、MetaphaseII率は19%であった。3.家兎卵巣の冷蔵保存:FSH処理後12時間目の雌家兎から卵巣を取り出し、冷蔵保存したのち卵胞卵を培養した結果、保存液に蔗糖を添加しても、短期間で大部分の卵子が死滅した。これは、ムチン層の付着した家兎胚の冷蔵保存可能期間が極めて長いのとは対照的であった。4.卵巣および卵胞卵のガラス化保存:卵巣を、そのままあるいはスライスした後、EFS液(40%Ethylene glycol+18%Ficoll+0.3Mー蔗糖添加PB1)に浮遊させて-196℃にガラス化保存した結果、融解後の卵巣からは、全く生存卵子は得られなかった。新鮮卵巣から卵胞卵を採取後ガラス化保存した結果、低率ながら生存卵子が回収された。以上の結果より、冷蔵状態では卵巣の保存が可能であるが、現段階では、ガラス化状態の保存は卵子を採取して保存することが必要である。

1. Discussion on the composition of the basic preservation solution: When the mulberry embryos are stored at 0°C, the addition of sucrose (0.75M) is effective and effective. It is easy to determine the viability of 2-cell stage embryos ~ morula embryos, and the composition of the cold storage solution is suitable for the results. , (1) The appropriate concentration of sucrose is the same as the growth stage, (2) The embryo is stored in the early stage of the growth stage, and the possible storage period is short. , (3) The pH of the preservation solution is neutral to weakly acidic, and (4) the pH of the preservation solution is neutral, and the pH of the preservation solution is neutral (P B1 liquid), bicarbonate acid (KRB liquid), HEPES (M2), HEPES (M2), HEPES (M2), HEPES (M2), HEPES (M2), HEPES (M2), HEPES (M2). 2. Cold preservation of maize eggs: 48 hours after PMSG injection, the ICR system of female maize stems is taken out and kept at 0℃ in M2 The liquid is preserved and the egg cells are collected and cultured. The normal morphological rate is Metaphase II and the maturation rate is をしらべた.その results, (1) 1-time preservation survivability is low, low temperature susceptibility is recognized, and survivability is low. (2) The effect of adding sucrose to the preservation solution and the 0.5 to 1.0M range is clear. (3) The survival rate during storage is low, the normal egg rate after 48 hours is 48%, and the Metaphase II rate is 19%. 3. Preservation of female eggs in cold storage: 12 hours after FSH treatment, the female eggs should be taken out and stored in cold storage. As a result of the egg culture, the preservation solution is added with sucrose, and most of the eggs are destroyed in a short period of time.これは, ムチンlayerの富した家兎Embryoの热蔵storage possible period is が极めて长いのとは対光であった. 4. Preservation of egg yolk egg cells: egg yolk, ovary ovum, EFS solution (40% Ethylene Glycol+18% Ficoll+0.3Mーsucrose added PB1) The result of thawing and preserving eggs at 196℃, the result of thawing, and the survival of eggs after thawing. Fresh eggs are harvested and stored, and the result is low-rate recovery of viable eggs. The results of the above are より, the cold 蔵 state では egg 壣 の preservation が is possible で あ る が, the current stage で は, the ガラ ス oxidation state の egg の egg を adopted し て preservation す る こ と が neccessary で あ る.

项目成果

葛西 孫三郎: "マウス胚の凍結保存ーvitrification法ー" 臨床科学. 27. 223-228 (1991)

Magosaburo Kasai：“小鼠胚胎冷冻保存-玻璃化方法”《临床科学》27. 223-228 (1991)。