家禽胚の超低温保存に関する研究

家禽胚胎超低温保存研究

• 批准号: 08876053
• 负责人: 葛西 孫三郎
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08876053/
• 关键词: ニワトリ; 胚; ガラス化保存; エチレングリコール; 胚盤葉期

本研究では,マウス胚で用いられているガラス化法を用いて,未だ開発されていない鳥類の胚の超低温保存を試みた。放卵直後のニワトリ有精卵を10〜12℃で冷蔵保存し,1週間以内に使用した。まず,卵黄膜に包まれた胚を卵黄ごと純水または1Mショ糖液中に浸し,重量の経時的変化から卵黄膜の水の透過性を調べた。その結果,卵黄膜の水透過性は非常に低く,胚を卵黄の中にとどめたままガラス化保存することは不可能であると考えられた。そこで,胚盤葉期の胚の部分のみを卵黄膜にセロハンテープ片を張り付けて切り取り,25℃の室温でエチレングリコール主体のガラス化溶液(EFS40)で処理した後超低温保存を試みた。まず胚細胞の生存性を調べるために,胚をEFS40に1〜60分間浸し,直ちに,あるいは液体窒素で保存後に,0.5Mショ糖添加PBSに2分間浸してガラス化溶液を除去し,PBSに回収した。サンプルから胚細胞をかき取って37℃で10分間トリプシン処理し,トリパンブルーで染色して生存率を調べた。その結果,EFS40 で1〜5分間処理した胚では85%以上の細胞が生存しており,ガラス化保存後も2〜5分間処理区では70〜80%が生存していた。次に,胚の発生能を調べるために,胚を剥離してEFS40 に1〜10分間浸し,直ちに,あるいは液体窒素で保存後にガラス化溶液を除去し,卵黄膜の培地上で37℃で3日間培養して体節形成期までの発育能力を調べた。その結果,2分間処理した胚では50%が体節形成期まで成長した。そこで、2分間処理した胚のガラス化保存を試みたが,胚の発生は認められなかった。ニワトリ胚の超低温保存が可能かどうかについてはさらなる検討が必要である。

In this study, the cryopreservation of human embryos was carried out by using the method of cryopreservation. After laying the eggs, the sperm and eggs were stored in cold storage at 10-12 ℃, and the eggs were used within 1 year. The yolk membrane was immersed in 1m sugar solution, and the yolk membrane was permeated with water at low weight. The results showed that the water permeability of yolk membrane was very low, and it was impossible to test the water permeability of yolk membrane. The yolk membrane, the embryo, the yolk membrane, the yolk membrane The survival rate of the embryo cells was determined. The embryos were soaked in EFS40 in 1-60 minutes, then washed directly. After preservation of asphyxiant liquid, 0.5 M glucose was added to PBS and 2 minutes was added to the solution. The solution was then removed and PBS was recycled. The embryo cells were collected from 37 ℃ to 10 minutes, and the survival rate was measured by staining. The results showed that more than 85% of the embryos survived within 1-5 minutes of EFS40, and 70% of the embryos survived at 2-5 minutes after cryopreservation. In the second stage, the embryos were incubated, the embryos were soaked in EFS40 in 1-10 minutes, the embryos were soaked in liquid asphyxins, and the yolk membranes were cultured on the ground at 37 ℃ and 3 days. The results showed that 50% of the embryos grew up during the formation period within 2 minutes. After 2 minutes of treatment, the embryos were saved and preserved, and the embryos were born. The embryo is cryopreserved. It is possible that the embryo is cryopreserved.