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魚類の卵子および胚の凍結保存

鱼卵和胚胎的冷冻保存

基本信息

批准号：
06F06223
负责人：
葛西孫三郎
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kochi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

体積が大きい、小型淡水魚の未成熟卵子の凍結保存を成功させるためには、細胞膜の水透過性と耐凍剤透過性を向上させることが必要である。昨年度は、メダカ未成熟卵子を用いて、水・耐凍剤チャンネルであるaquaporin-3(AQP3)cRNAを注入してこのチャンネルを人為的に発現させることにより、細胞膜の水透過性と耐凍剤透過性を向上させることに成功した。今年度は、ゼブラフィッシュ未成熟卵子を用いて、細胞膜の水透過性と耐凍剤透過性をしらべ、さらにAQP3の人為的発現による水透過性と耐凍剤透過性の向上を試みた。ゼブラフィッシュの未成熟卵子は、メダカと同様に、成熟卵子と比べて水透過性と耐凍剤透過性が著しく高かった。次に、ゼブラフィッシュ未成熟卵子にAQP3 cRNAを注入してAQP3を人為的に発現させ、細胞膜透過性がさらに向上するかどうかをしらべた。その結果、水透過性も耐凍剤透過性も大きく向上した。しかしながら、ゼブラフィッシュ未成熟卵子を従来用いられている体外成熟培養法で培養しても、AQP3 cRNA注入の有無にかかわらず、成熟した卵子はほとんど受精・発生しなかった。そこで、体外受精後の受精率と孵化率を指標として、正常に体外成熟する新しい培養法の開発を試みた。そして、ウシ血清アルブミンを含むアルカリ性の新しい培養液を考案し、LHサージ前の未成熟卵子を高率に受精・孵化させることができる体外成熟培養系を確立した。現在、AQP3を発現させたゼブラフィッシュ未成熟卵子を凍結保存することが可能かどうかしらべている。

Large body water, small fresh water and immature oocytes were conserved successfully, and the membrane water permeability was tolerated and permeable. Last year, the water tolerance of immature eggs and water tolerance was tested. Aquaporin-3 (AQP3) cRNA was injected into the human body to improve the safety of immature oocytes and membrane water permeability. This year, we tested immature oocytes for immature oocytes, membrane water permeability test, cell membrane penetration test, AQP3 test for artificial detection of water permeability, water permeability tolerance for immature oocytes, and upward test for cell membrane permeability test. The levels of immature eggs, mature eggs and mature eggs are higher than those of immature eggs. In the second half of the experiment, the immature eggs were injected into the AQP3 by artificial AQP3 cRNA injection, and the cell membrane permeation rate was increased. The results of the test, water permeability, tolerance to water permeability, water permeability and water permeability. The immature oocytes were incubated with the method of in vitro maturation, AQP3 cRNA injection, mature oocytes, mature oocytes and fertilized eggs. The fertilization rate and hatching rate after in vitro fertilization (IVF) and the new training method for normal in vitro maturation (IVF) were tested. There is a high rate of fertilization and incubation of immature eggs before LH infection, and there is a high rate of fertilization and incubation of immature eggs. At present, the AQP3 has shown that it is possible to save the immature eggs.