死亡動物の性細胞の保存と利用に関する研究

动物死亡性细胞的保存与利用研究

• 批准号: 06660359
• 负责人: 葛西 孫三郎
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06660359/
• 关键词: 死亡動物; 卵子; 精子; マウス; ラット; 体外受精; 低温保存

ICR系あるいはBDF1マウスおよびWistar-Imamichi系ラットを、頚椎脱臼あるいは頭部殴打によって死亡させたのち、4℃あるいは20℃に1〜10日間保存し、性細胞が生存可能な期間をしらべた。雌動物は、屠殺48時間前にPMSG処理を施しておき、保存後の卵胞内未成熟卵子の形態と対外培養後の成熟率をしらべた。雄動物からは精巣上体尾部精子を採取し、修正KRB液中に懸濁させて生存性と運動性を観察した。さらに、一部の卵子と精子は、体外受精によって前核期〜2細胞用までの発生能をしらべた。雄マウスは、20℃に保存すると3日後には精子は死滅していたが、4℃に保存すると5日後も高率に生存しており、10日後にも生存精子が確認された。保存動物の精子は、屠殺直後に採取した精子に比べて培養後の生存性の低下が顕著であったが、5日間保存した精子を新鮮な卵子と体外受精すると、前核期〜2細胞期まで発育した。ラット精子もマウスとほぼ同様の傾向を示したが、保存精子を用いた体外受精によって受精卵は得られなかった。屠殺後20℃に1日間保存した雌マウスからは形態的に正常な卵子は回収されなかったが、保存温度が4℃の場合は50%以上の卵子が正常な形態を有しており、培養後に乱核胞崩壊〜第2成熟分裂中期への成熟が観察された。しかし、4℃においても2日間保存後には、正常な形態を維持した卵子の割合は大きく低下し、正常な成熟は確認されなかった。ラット卵子も同様の傾向がみられたが、4℃に1日間保存した雌から採取した卵子を体外受精後に体外受精して、低率ながら受精が確認された。一部の未受精卵子は、EFS液を用いてガラス化保存したが、耐凍剤の除去過程に損害を受けやすいことが観察された。本研究の結果、死亡動物の生殖細胞を利用する場合はできるだけ早く冷蔵することが重要であり、卵子は死亡後1日以内に採取する必要があるが、精子は5日間以上保存しうると考えられる。

ICR system あるいはBDF1 マウスおよび Wistar-Imamichi system ラットを, vertebrae dislocation あるいは head beating It can be stored for 1 to 10 days at 4°C or 20°C, and it can be kept during the period of possible survival of sex cells. The female animals were treated with PMSG 48 hours before slaughter, the morphology of immature eggs in the eggs after preservation, and the maturation rate after external culture were determined. The male sperm is collected from the tail of the upper body of the sperm, and the suspension in the KRB fluid is corrected to determine the viability and motility of the sperm. In vitro fertilization, pronuclear stage ~ 2 cells, and egg and sperm are used to produce energy. The male sperm is stored at 20℃ and the sperm will die after 3 days. The sperm is stored at 4℃. There is a high rate of sperm survival after 5 days, and a sperm survival rate after 10 days. Preserved animal sperm and the sperm collected directly after slaughter are less viable than those collected after culture.が, 5-day preservation of sperm, fresh eggs, in vitro fertilization, and incubation of pronuclear stage to 2-cell stage.ラット sperm もマウスとほぼ Same 様 の inclination を Show し た が, sperm preservation を い た in vitro fertilization に よ っ て fertilized egg は ら れ な か っ た. In the case where normal eggs of normal eggs are stored at 20°C for 1 day after slaughter, and the storage temperature is 4°C. More than 50% of the eggs have normal morphology, and after culture, they have nuclear cytosis and the second mature stage of cleavage.しかし, 4℃ においてもには after 2 days of storage, normal な form を maintenance した egg の cut and combined は large き く low し, normal な mature は confirmation され な か っ た. The ラットovum is the same as the tendency of がみられたが, and it is stored at 4℃ for 1 day and is collected from females. After egg collection and in vitro fertilization, in vitro fertilization is carried out, and low fertilization rate is confirmed. One part of the unfertilized egg has been preserved, and the EFS liquid has been preserved by the sterilization process. The results of this study, the use of germ cells of dead animals, and the occasion are important. It is necessary to collect eggs within 1 day after death, and it is necessary to store sperm for more than 5 days.