糸状菌分泌酵素遺伝子を利用した酵母分泌系の解析

利用丝状真菌分泌酶基因分析酵母分泌系统

• 批准号: 02660109
• 负责人: 堀内 裕之
• 金额: --
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02660109/
• 关键词: 糸状菌; Rhizopus; 分泌; Saccharomyces cerevisiae; aspartic proteinase

糸状菌Rhizopus niveusの菌体外アスパルティックプロテイナ-ゼI(RNAPーI)遺伝子をSaccharomyces cerevisiaeに導入すると効率よく菌体外に分泌されるが、このプロ配列中に変異を導入した改変遺伝子をS.cerevisiaeに導入したところ全く分泌されなくなった。そこで本研究ではこのような改変RNAPーI遺伝子を導入したS.cerevisiaeに対し各種の変異原で変異をかけ、改変RNAPーI遺伝子産物を菌体外に分泌するようになる変異株を取得し解析することを目的とした。変異株はカゼインを含む培地上でハロ-を形成するようになるものを選択した。まず変異原としてUVを用い約3800株のコロニ-に対してカゼイン培地上でのハロ-形成を検討したところこのうち121株がハロ-形成を行なった。これらの変異株のうちその変異が染色体上に由来するものを選択するために、形成されたハロ-が比較的大きい70株についてRNAPーI遺伝子を含むプラスミドのキュアリングを行なった。その結果、プラスミドのキュアリングによりハロ-形成をしなくなった株が37株存在した。そこでこれら変異株に再度改変RNAPーI遺伝子を導入し、カゼイン培地上でハロ-形成能を獲得した株については変異が染色体上に由来する可能性が強いと考えさらに解析を進めた。このような株は9株存在し菌体外へのRNAPーIの分泌量について培養上清の酵素活性測定、SDSーPAGEなどにより解析を行なった結果、分泌量が比較的多くSDSーPAGE上で成熟型RNAPーIと同じ位置にバンドが見られる変異株が1株得られている。変異原としてEMSを用いたものについても約4000株についてハロ-形成を検討したところ138株の変異株が得られた。このうち16株についてプラスミドのキュアリングと再形質転換を行ない、染色体上に変異が導入されていると思われるもの1株を得ている。現在、新たな変異株の取得を続行すると共にこれまでに得られた変異株の解析をさらに進めている。

In vitro secretion of Rhizopus niveus (RNAP I) gene from Saccharomyces cerevisiae was studied. In vitro secretion of S. cerevisae, the gene from Rhizopus niveus was studied. In this study, the RNAP I gene was introduced into S. cerevisae and the RNAP I gene product was secreted in vitro. The difference between the two is that About 3800 strains were used in the study of heterogenesis and 121 strains were used in the study of heterogenesis. This is the first time that a person has ever been involved in an act of violence against women. There are 37 plants in the field. The possibility of genetic modification of RNAP gene in different plants is very strong. 9 strains were found to have RNAP I secretion in vitro, and 1 strain was found to have RNAP I mature in the same position on SDS PAGE. About 4000 plants were produced by EMS, and 138 plants were produced by EMS. 16 of these strains were introduced into the genome, and 1 of them was transformed into the genome. Now, the acquisition of new plants and the analysis of new plants and the analysis of new plants

项目成果

堀内 裕之: "Highーlevel Secretion of a Rhizopus niveus Aspartic Proteinase in Saccharomyces cerevisiae" Agric.Biol.Chem.54. 1771-1779 (1990)

Hiroyuki Horiuchi：“酿酒酵母中雪根霉天冬氨酸蛋白酶的高水平分泌”Agric.Biol.Chem.54 1771-1779 (1990)。