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酵母の小胞体内におけるフォールディングが異常な蛋白質の認識・分解機構の解析

酵母内质网异常折叠蛋白的识别和降解机制分析

基本信息

批准号：
06660093
负责人：
堀内裕之
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

糸状菌Rhizopus niveusが菌体外に分泌するaspartic proteinase-I(RNAP-I)のプロ配列を除いた改変体Δproを菌体外に蓄積するようになった変異株8株のうち3株(No.2、22、52)について掛け合わせを行ったところこれらはすべて一遺伝子の変異であり劣性変異であることが明らかとなった。そこでこのうちΔproの細胞内への蓄積量がもっとも多い変異株No.22についてその後の解析を行った。まず変異株No.22においてΔproの細胞内蓄積量の経時変化を検討するためΔproをSaccharomyces cerevisiaeの誘導可能なプロモーターであるGAL1プロモーターの下流につなぎ、グルコースをC源とした培地で培養後、ガラクトースをC源とした培地にシフトしたところ、培地をシフト後野生株では9時間目から細胞内でのΔproの蓄積がみられるのに対し、変異株No.22では3時間目から蓄積がみられた。また蓄積しているΔproは、細胞内で凝集を起こしておりこの凝集体には酵母の小胞体内でシャペロンとして働くKAR2産物(Bip)も含まれていることが明らかになった。さらに変異株No.22においても野生株同様、Δproの蓄積に伴ってBipの発現の誘導が起こっていることが認められた。これらのことより変異株No.22は野生株よりも凝集したタンパク質の分解の能力が低い、または、凝集したタンパク質の可溶化の能力が低いなどの可能性が考えられる。現在、この変異を相補するクローンをS.cerevisiaeの遺伝子ライブラリーよりスクリーニング中でこれまでにこの変異の表現形を完全に相補するクローン3個、部分的に相補するクローン2個を得ている。

In vitro, Rhizopus niveus bacteria secreted aspartic proteinase-I (RNAP-I) in vitro, except that the modified strain Δ pro was stored in vitro. Eight strains (No.2, 22, 52) were isolated from 8 strains of bacteria (No.2, 22, 52). In this study, the intracellular concentration of Δ pro was measured, and the number of No.22 plants was analyzed after the accumulation of intracellular DNA. It is possible to induce the accumulation of active energy in the cells of the No.22 strain Δ pro strain during the incubation period. It is possible that the GAL1 is affected, the GAL1 is affected, the source of the plant is incubated, and the source of the plant is incubated. After incubation, the wild plants were incubated for 9 hours, and the pro was stored in the cells of the wild plants for 9 hours and the No.22 plants for 3 days. The pro was stored in the cell, and the intracellular agglutination was performed in the yeast cytosol. The yeast microcyt contained the KAR2 substance (Bip). The wild No.22 strain is the same as the wild strain, and the Δ pro plant is the same as the wild strain, and the Δ pro plant is stored with the same strain of the wild plant. The result shows that there is no significant difference between the two. The No.22 wild strain was isolated from the wild plant, the ability to decompose was low, the ability to dissolve was low, the possibility was tested. At present, there are three phase-by-phase traps in each other, and there are two in part of the S.cerevisiae sub-schools.