Involvement and the Molecular Mechanisms of Inositol-1.4.5 Trisphosphate Receptor in the Expression of Neuronal Functions

肌醇1.4.5三磷酸受体参与神经元功能表达及其分子机制

• 批准号: 02670107
• 负责人: NIINOBE Michio
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1992
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670107/
• 关键词: IP_3 Receptor; IP_3; IP_4 Binding Protein; IP_4; アルドラーゼ; IP_4BPI; IP_4結合蛋白質; IP_4受容体; IP_3受容体,; Ca^<2+>チャンネル

1,IP_4結合蛋白質(IP_4BP1)に対するポリクローナル抗体を用いて,マウス脳における本蛋白質の局在性について免疫組織化学的に解析したところ,IP_4BP1は中枢神経系全体に存在することが認められ,とくに,嗅球の外網状層,僧帽細胞層,大脳皮質錐体細胞の細胞体と樹状突起,海馬の放射線維層,小脳プルキンエ細胞の細胞体と樹状突起及び糸球体(顆粒細胞と苔状線維のシナプス形成部位)に高い局在を示した。2,精製したIP_4BP1及びIP_3受容体をそれぞれ人工脂質膜に組み込みIP_3あるいはIP_4による^<45>Caの取り込みが認められるか否か調べたところ,IP_3受容体の場合は強い取り込みが認められたが,IP_4BP1に関しては,今回の実験条件下では何らの取り込みも認められなかった。IP_3受容体の場合は抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィーで一段階の操作で精製したものを用いたときにのみ取り込みがみられたところから,IP_4BP1についても変性を極力抑えた条件下での精製法を開発する必要が考えられた。3,精製したIP_4BP1のSDS PAGE像では140Kと65Kの2本の分子種が存在する。これらについて,PVDF膜にトランスファーレ,リジルエンドペプチダーゼ消化を行ない,HPLCで分析したところ,ペプチドの溶出パターンが極めて類似しており,両者が一次構造上高いホモロジーを持つものと推測された。また,140K分子については,それぞれのピークについて現在,アミノ酸配列を決定しつつある。4,IP_4結合蛋白質はマウス小脳には少くとも3種類存在することを既に明らかにしているが,IP_4BP1以外の分子種の一つを完全精製し,N未端からのアミノ酸配列を調べた結果,アルドラーゼのAタイプと同じ配列を持つことが認められた。アルドラーゼはIP_3とも強いアフィニティーを持つことが報告されており,アルドラーゼの細胞内機能にIP_3及びIP_4がどのように関わりを持つのか現在,検討しつつある。

1 the fusion protein (IP_4BP1) of this protein (IP_4BP1) was used to detect the antibody of this protein, and the immunocytochemistry of this protein was used to analyze the immunocytochemistry of this protein. In all the central clones of the IP_4BP1, there was an exoskeleton of the olfactory bulb, a monk's cap cell, and a protuberance of the cell body of the body of the animal. The radiating line of the sea fish is wide, the cell body is like a protuberance of the cell body, and the high part of the cell body (the part where the moss of the cell is formed) is shown. 2. Precision IP_4BP1 and IP_3 acceptor resin artificial lipid membrane preparation, IP _ 3

项目成果

Kuwashima,G.: "Two types of rianodine receptors in mouse biain:Skeletal muscle type exclusinely in Purkinje cells and cardioc muscle type in ranous neurons." Neuron. 9. 1133-1142 (1992)

Kuwashima，G.：“小鼠体内有两种类型的利尼定受体：仅存在于浦肯野细胞中的骨骼肌类型和存在于无序神经元中的心肌类型。”

Otsu,H: "Immurogold localization of Inositol 1,4,5ーtrisphosーphote(InsP_3)receptor in mouse orebellar Purkinje cells using three monocloral antiboclies." Cell Structure and Function. 15. 163-173 (1990)

Otsu, H：“使用三种单克隆抗体对小鼠脑组织浦肯野细胞中的肌醇 1,4,5-三磷酸 (InsP_3) 受体进行 Immugold 定位。” 15. 163-173 (1990)。

Maeda,N.: "Structural and functional cheractesization of Inositol 1,4,5ーtrisphosphate receptor chnnel from mouse cerebellum." J.Biol.Chem.266. 1109-1116 (1991)

Maeda, N.：“小鼠小脑肌醇 1,4,5-三磷酸受体通道的结构和功能特征。J.Biol.Chem.266 (1991)。

Nakade,S.: "Involvement of the Cーterminas of the inositol 1,4,5ーtrisphophate receptor in Ca^<2+>release analysed using regionーspecific monoclonal antibodies." Biochem.J.277. 125-131 (1991)

Nakade, S.：“使用区域特异性单克隆抗体分析肌醇 1,4,5-三磷酸盐受体的 C 末端参与 Ca^2+ 释放。” 1991)

Maeda, N: "A cerebellar Purkinje cell marker P400 protein is an inositol 1, 4, 5-trisphosphate (InsP_3) receptor protein. Purification and characterization of InsP_3 receptor complex" EMBO J. 9(1). 61-67 (1990)

Maeda, N：“小脑浦肯野细胞标记 P400 蛋白是肌醇 1,4,5-三磷酸 (InsP_3) 受体蛋白。InsP_3 受体复合物的纯化和表征”EMBO J. 9(1)。