DNA分析によるサラセミア症の病態解析と遺伝子の制御研究

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1.Hb Sーβ ^+サラセミア(Thal)症の遺伝子増幅法(PCR)による病態解析:Sickling Testが陽性の患児の末梢血液検査、ヘモグロビン(Hb)分析、Hb構造解析、Hb合成試験の結果からHb Sーβ ^+Thal症と診断した症例の末梢血液白血球から得たDNAを解析し、β ^+Thalの原因を遺伝子レベルで解明した。患児のDNAとβ鎖グロビン領域(2、8kb)を含む合成プライマ-、各種のdNTPおよび増幅反応酵素Taq DNAポリメラ-ゼをProgrammable Thermal Controllerで変性、アニ-リング、伸長反応を繰り返し、増幅DNAを得、M13ファ-ジベクタ-に組み込み、1本鎖DNAを調製後、dideoxy法で塩基配列を決定した。この結果.β6位がGAG(Glu)→GTG(Val)へ変換したHb Sが確認された。Hb Sではない方の遺伝子からはPoly AサイトのAATAAA→AACAAA置換が見いだされβ ^+Thalの原因に考えられた。従って本患者はHb Sとβ ^+Thalとのダブルヘテロ接合体であることが明らかになった。最近は外国人居住者が増加して、日本人には見られないが外国人にはよくみられる血液異常の判定も必要になっている。2.PCR法による異常血色素 Hb Isehara(Hb Redondo)の構造解析:異常Hbの蛋白構造異常はグロビン鎖遺伝子の塩基配列の変異によって引き起こされるものである。貧血の原因がヘムをはずしやすい不安定異常Hbである患者の異常Hbのタンパク質分析でβ92His→Asxであった患者のDNAをPCR法で増幅し、遺伝子解析を試み異常Hb遺伝子の変異β92CAC(His)→AAC(Asn)を明らかにした。PCR法を応用した血色素異常症の解析は、蛋白分析が困難な場合においても有効なので検査診断医学分野における重要な解析法となっている。サラセミアや異常Hb症は日本人にはまれであるとされてきたがこの他にもこの1年間だけでサラセミア9例、異常Hb88例の異常の実態(遺伝子異常)が明らかにされた。