エリスロポエチンの作用機序の解明、特にエポ反応性リン酸化蛋白の遺伝子クロ-ニング

阐明促红细胞生成素的作用机制，特别是Epo反应性磷酸化蛋白的基因克隆

• 批准号: 02671130
• 负责人: 津田 弘之
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02671130/
• 关键词: エリスロポエチン; シグナル伝達; リン酸化; チロシンリン酸化; 癌遺伝子; 刺激伝達; 蛋白質リン酸化; 核内癌遺伝子

依存性細胞株を用いたエリスロポエチン(EPO)細胞内刺激伝達の解析はこれまで1)Epoの細胞周期における作用点 2)Aキナ-ゼ系及びPIーCキナ-ゼ系の関与などについて明らかにしてきた。今回テ-マに掲げた細胞蛋白リン酸化反応については以下の事が解った。すなわち、Epo刺激後1分以内にELMーIー1細胞膜分画に特異的に脱リン酸化されるペプチド(pp98)がみられた。pp98はセリン残基にリン酸化をうけており、脱リン酸化は30分で回復した。このペプチドとEpo受容体との関係が興味あるところであるが、非常に微量である事より以後の研究はあまり進行していない。一方、細胞増殖・分化と深く関っているチロシンリン酸化についても解析を進めている。Epo刺激後、ELMーIー1細胞には分子量80ー85KDa(py80)のチロシンリン酸化蛋白が検出来る。この反応は5ー10分で最高となり、以後減弱する。またpy80はEpo以外の、ILー3やGMーCSFでは誘導されない。しかも、Epoで分化するELMーIー1細胞ではみられるが、増殖反応のみを示すDAー1ERではみられない。この事より、Epoによる分化刺激に関与するものかもしれない。癌遺伝子cーrafとの関係が問題になるが、その産物Rafー1(74kDa)とは分子量が明らかに異なる。今後二のペプチド及びチロシンキナ-ゼの分離同定を行う予定である。これらの研究に加え、我々は核内癌遺伝子cーfos mRNAのEpo刺激初期(<15分)の上昇を明らかにしているが、この現象と上記リン酸化反応との関係を明らかにする実験系を現在作製中である。

The analysis of intracellular stimulation response of dependent cell lines (EPO): 1)Epo's cell cycle action point 2) Relationship between A and C systems. This is the first time I've seen a cell protein acidify. ELM-1 cell membrane analysis within 1 minute after Epo stimulation was performed with specific deacidification (pp98). pp98 - 30 minutes to recover from the residue acidification The relationship between this candidate and the Epo receptor is very interesting and very small. Future research will continue. A party, cell proliferation, differentiation, acidification, analysis, and development After Epo stimulation, a Curosinilin-acidified protein with a molecular weight of 80 - 85KDa(py80) was detected in ELM-I-1 cells. 5 - 10 minutes, the highest, and then weakened. Py80, IL-3, GM-CSF, etc. ELM-1 cells are differentiated and proliferated, and DA-1 cells are differentiated. This matter is closely related to Epo's divisive stimuli. The relationship between cancer gene c-raf and its product Raf-1(74kDa) is different. From now on, we will choose the best way to solve the problem. In this study, we found that the expression of c-fos mRNA increased in the early stage of Epo stimulation (<15 min), and the relationship between c-fos mRNA and Epo mRNA was studied.

项目成果

H.Tsuda,T.Sawada et al: "Mode of action of erythropoietin in an Epoーdependent murine cell line I." Experimental Hematology. 17. 211-217 (1989)

H. Tsuda、T. Sawada 等人：“促红细胞生成素在 Epo 依赖性小鼠细胞系 I 中的作用模式”，《实验血液学》17. 211-217 (1989)。

H.Tsuda,T.Sawada et al: "Mode of action of erthropoietin in an Epoーdependent murine cell lineII." Experimental Hematology. 17. 218-222 (1989)

H. Tsuda、T. Sawada 等人：“促红细胞生成素在 Epo 依赖性小鼠细胞系 II 中的作用模式”，《实验血液学》17. 218-222 (1989)。

T.Sawada,H.Tsuda et al: "Rapid protein tyrosine phosphorylation selectively indaced in murine responsive ELMーIー1 cells by erythropoietin" Experimental Hematology.

T. Sawada、H. Tsuda 等人：“促红细胞生成素在小鼠反应性 ELM-I-1 细胞中选择性诱导快速蛋白酪氨酸磷酸化”实验血液学。

津田 弘之: "Alteration of nuclear protoーoncogene Expression by erythropoietin (Epo) in Epoーresponsive murine cell lines." International Journal of Cell Cloning. (1991)

Hiroyuki Tsuda：“促红细胞生成素 (Epo) 在 Epo 反应性小鼠细胞系中改变核原癌基因表达”（国际细胞克隆杂志）。

H.Tsuda,T.Sawada et al: "Action of erythropoietin in DAーIER cell is independent of inositol lipid transduction." Acta Hematologica Japonica. 53. 13-22 (1990)

H. Tsuda、T. Sawada 等人：“DA-IER 细胞中促红细胞生成素的作用与肌醇脂质转导无关。”Acta Hematologica Japonica 53. 13-22 (1990)。