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ペルオキシソ-ム局在性β酸化系酵素の遺伝子の誘導に関与するDNA配列の解明

阐明参与过氧化物酶体定位 β-氧化酶基因诱导的 DNA 序列

基本信息

批准号：
02680155
负责人：
大隅隆
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ラット肝アシルーCoAオキシダ-ゼの抗高脂血薬剤による誘導の分子機構を明らかにするため、トランスフェクション実験とタンパク質結合実験によって、この酸素の遺伝子の5'上流域に存在する転写調節DNA配列を同定することを試みた。2.まずラットヘパト-マH4IIEC3細胞の培養液に抗高脂血薬剤に一種シプロフィブレ-トを添加することによって本酵素がmRNAレベルで顕著に誘導されることを見いだし、この細胞がin vitroの誘導実験に有用であることを示した。3.オキシダ-ゼ遺伝子の5'上流域の種々の部分の配列をクロラムフェニコ-ルアセチルトランスフェラ-ゼ(CAT)遺伝子の上流につないだ組換えプラスミドを作成し、リン酸カルシウム法によってH4IIEC3細胞に導入した。培地にシプロフィブレ-トを添加した時および添加しない時のCATの発現量を測定することによって、誘導能および基礎発現活性をモニタ-した。その結果、本遺伝子の上流域には少なくとも3つの役割の異なる領域が存在することがわかった。そのうち転写開始点の上流639塩基から472塩基にかけての部分には、抗高脂血薬剤応答性エンハンサ-としての機能があることがわかった。4.このエンハンサ-領域の配列をプロ-ブとして、ラット肝臓核抽出液を用いたフットプリントアッセイ、およびゲルシフトアッセイを行い、2つのタンパク質結合部位を見いだした。5.上記の2つのタンパク質結合部位の配列をもつオリゴヌクレオチドを合成し、これを基礎プロモ-タ-と共にCAT遺伝子につないだものをH4IIEC3細胞にトランスフェクションして発現を調べた。その結果、1つの配列は強い転写促進活性をもつが誘導能は低いこと、もう一方は転写を抑制するが、2つの配列が共存することによって高い誘導能が得られることが明らかになった。

1. The molecular mechanism for the induction of anti-hyperlipidemia drugs by the enzyme CoA was investigated. 2. The addition of an anti-hyperlipidemia agent to the culture medium of H4 IIEC3 cells and the induction of mRNA expression of this enzyme are useful in the induction of these cells in vitro. 3. The up-stream of CAT gene is composed of the 5'upper watershed of the plant species, and the H4IIEC3 cells are introduced into the system by the acid cluster method. The activity of CAT was measured when the enzyme was added to the culture medium. As a result, the original text of the upper basin is less than 3 years old, and the different fields exist. The function of anti-hyperlipidemic drug is to write the starting point of 639-base, 472-base, and some parts of it. 4. The arrangement of the domain of the liver is divided into two parts: the first part is divided into three parts: the first part is divided into three parts: the second part is divided into three parts: the third part is divided into three parts: the fourth part is divided into three parts: the fourth part is divided into four parts: the fourth part is divided into three parts: the fourth part is divided into four parts: 5. In the above note, the two kinds of binding sites are arranged in different ways, such as the synthesis of CAT gene, and the development of H4IIEC3 cell binding sites. As a result, 1. The arrangement of the two elements is strong, and the activity is promoted. 2. The arrangement of the two elements is blue shift. 3. The induction energy is low, and the induction energy is high.