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部位特異的改変法を用いた抑制性グリシン受容体の機能領域の同定

使用位点特异性修饰方法鉴定抑制性甘氨酸受体的功能区域

基本信息

批准号：
03670092
负责人：
赤木宏行
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳類中枢神経系において重要な役割を果たしている抑制性グリシン受容体の構造と機能の関係を明らかにすることを目的とし、ラット脊髄cDNAライブラリ-より単離したグリシン受容体をコ-ドするcDNAの一部を改変することを試みた。Mutant DNAを作製するための手法を検討した結果、Polymerase chain reaction(PCR)法を利用するのが最も効率的であることがわかった。この手法を利用して、以下の変異DNAを作製した。(1)シグナル配列の一部(6個のアミノ酸)を欠損させたもの、(2)グリシンが結合すると予測される領域付近の構造の一部(22個のアミノ酸)を欠損させたもの、(3)糖鎖結合に関与するアスパラギンをアラニンに置換したもの、(4)SーS架橋すると思われるシステインをアラニンに置換したもの。これらの変異体DNAを鋳型にしてin vitroでRNAを合成し、それらをアフリカツメガエルの卵母細胞に注入して変異グリシン受容体を発現させた。電気生理学的手法を用いてグリシン適用により惹起されるクロライド電流の大きさを測定し、変異受容体の活性の強さを野生型受容体のそれと比較した。その結果、(1)の変異受容体はコントロ-ルと同等の活性を保持したことから、受容体タンパクのシグナル領域の構造はは必ずしも機能発現には必須ではないことが示された。これに対し(2ー4)の変異DNAから合成される受容体はいずれも機能活性が著しく低下しており、改変部位の領域が機能発現に密接に関与することが示唆された。現在はイオンチャンネル構成領域や細胞内タンパクリン酸化領域を改変した種々の変異受容体の機能変化について引続き解析を行っている。

Mammals' central nervous system is an important part of the nervous system. It is an important part of the nervous system. It is an inhibitory receptor and it has a structure and a functional relationship. It is a clear purpose.とし、ラットridge髄cDNAライブラリ-より単利したグリシンThe receptor をコ-ドするcDNAの一をchange変することをtestみた. The mutant DNA production method is the most efficient one, and the Polymerase chain reaction (PCR) method is the most efficient one. The technique is based on the use of DNA, and the following DNA is used to make it. (1)シグナルの一一(6のアミノ acid)を无码させたもの, (2)グリシンが合すると Predicted される区 Nearly のstructural part (22 pieces of のアミノAcid) をowed Damage, (3) sugar lock combination and sugar lock replacementもの, (4) SーS bridging すると思われるシステインをアラニンに Replacement したもの. Allogeneic DNA を鋳 type にしてin Synthesis of RNA in vitro, Injection of RNA into oocytes in vitro, and Injection of RNA into recipient cells. The technique of electrophysiology is used to apply the electrophysiological method to induce electric current. The activity of large and small receptors was measured and the activity of different receptors was strong, and the activity of wild-type receptors was compared.そのresult, (1) の変different receptor はコントロ-ルとequivalent activity をmaintain したことから, receptor The structure of the タンパクのシグナル domain is necessary and the function must be displayed.これに対し(2ー4)の変different DNAからsynthetic される Acceptor はいずれも Functional Activity がThe functions of the lowered parts and the functional areas of the altered parts are closely connected with the functions of the damaged areas. Nowadays, the field of chemical composition and intracellular acidification field has been changed.変したkind々の変different receptor のfunctional change についてINDer続きanalytic を行っている.