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脊髄内痛覚伝導回路に関与する抑制性アミノ酸の役割:分子プロ-ブを用いた研究

抑制性氨基酸在椎管内疼痛传导回路中的作用：使用分子探针的研究

基本信息

批准号：
03260201
负责人：
赤木宏行
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03260201/
关键词：
痛覚脊髄グリシンレセプタ-免疫組織化学伝達物質

项目摘要

哺乳類脊髄において痛覚の制御にグリシン、GABA作動系ニュ-ロンが関与する可能性を探ることを目的として、以下の研究を行った。1.グリシン受容体サブユニット蛋白質を認識する抗体の調製痛み刺激を加えることにより脊髄のグリシン受容体量の変動を蛋白レベルで調べるために、ポリクロ-ン抗体の調製を試みた。我々のグル-プによりクロ-ン化されたグリシン受容体α1サブユニットcDNAの塩基配列から推定される蛋白の一次構造をもとにして、アミノ酸10残基からなるペプチドを合成した。これをKLHと結合したものを抗原にしてウサギに免疫した。数回の追加免疫を行った後、x10000倍の希釈率で抗原を認識する抗体が得られた。ラット脊髄の膜分画を可溶化し、ポリアクリルアミド電気泳動で分離した後、ウエスタンブロットを行った結果、48kDaの位置に存在する蛋白が抗体と反応することを確認した。この蛋白はcDNAクロ-ニングの結果から予測されるサブユニット蛋白質のサイズとよく一致した。この抗体を用いて、免疫組織化学的に受容体蛋白の分布を調べる研究に着手した。2.In situ hybridizationによる受容体RNAの分布の検討1.と平行して、クロ-ン化したグリシン受容体cDNAの制限酵素切断片をプロ-ブに用い、in situ hybridization法による脊髄内mRNAの分布を検討した。痛覚と関係する一次知覚ニュ-ロン終末が局在する脊髄後角の辺縁層や膠様質層にもグリシン受容体mRNAが多量に存在することを確認した。侵害刺激を加えた後の受容体mRNAの変動について検討を開始した。

In mammalian spinal cord disease, the control and control of the disease, the GABA action system, and the possibility of the disease, the purpose of the study is to explore the purpose of the study. 1. There was no change in the amount of protein in the body, the protein level, the protein level, the antibody level. I said that the acceptor α 1, the acceptor, the cDNA, the ligand, the protein, the receptor, the protein, the acid, the 10-residue, the receptor, the protein, the acid, the acid, The immunized mice were immunized with the combination of KLH and antigens. After several times of supplementary immunization, the rate was 10 000 times higher than that of antigen and antibody. The spinal cord membrane was separated by dissolving, the electrophoresis was separated by electrophoresis, and the results were confirmed by the detection of protein and antibody in the 48kDa site. The results show that the results are consistent with each other in terms of protein cDNA and protein concentration. The antibody was studied by means of immunocytochemistry and immunocytochemistry. The distribution of 2.In situ hybridization