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脊髄内痛覚伝導回路に関与する抑制性アミノ酸の役割

抑制性氨基酸在椎管内疼痛传导回路中的作用

基本信息

批准号：
04255202
负责人：
赤木宏行
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

抑制性グリシン受容体・C1^-チャネルの機能を修飾する細胞内情報伝達機構を明らかにすることを目的とし、ツメガエル卯母細胞に発現させたクローン化cDNA由来受容体(α1およびα2)の活性に対する種々の蛋白リン酸化関連薬物の効果を検討した。ラットtrigeminal neuronにおいてcyclic AMP-蛋白キナーゼA(PKA)系の賦活によりグリシン反応が増強されることが報告されているが、α1、α2homomeric受容体を介するC1^-電流に対しては、PKA関連薬物(forskolin,cyclic AMPなど)は有意な効果を示さなかった。蛋白キナーゼCを活性化するphorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)を低濃度(1-30 nM)で5-10分間、細胞に潅流適用したところ、α1およびα2受容体を介するグリシン(0.1mM)誘起電流はPMAの濃度に依存して抑制された。PMAの作用は持続的で、薬物除去後60分経過してもグリシン反応は回復しなかった。一方、ラット前脳から抽出したmRNAを注入した卯母細胞から記録されるカイニン酸(0.1mM)誘起電流はPMAにより阻害されなかった。PMAによるグリシン反応の阻害はstaurosporine(1μM)の存在下で減弱された。α1受容体のリン酸化部位となりうるSer,Thr残基をすべてAlaに置換した変異受容体に対してPMAは野生型受容体と同程度の抑制効果を示した。以上の結果から、PMAによるグリシン電流の抑制作用は蛋白キナーゼCの活性化によるものと推定されるが、その作用機構は複雑であると考えられる。

To investigate the effects of protein expression related compounds on the expression of inhibitory cDNA derived from receptors (α1-α2) and the activity of these receptors (α1-α2). C1^-current interaction between α1, α2homomeric receptors and PKA-related compounds (forskolin,cyclic AMP) is reported to increase the activity of cyclic AMP-protein A(PKA) system. The activation of phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA) was inhibited at low concentrations (1-30 nM) in 5-10 min, and the induced currents in cells were inhibited at low concentrations (0.1 mM) mediated by α1-α2 receptors. The effect of PMA is to maintain the stability of the system, and the recovery of the system after 60 minutes of chemical removal. The mRNA was injected into the primary cells and the PMA (0.1 mM) induced current was blocked. The inhibition of PMA on the reaction was reduced in the presence of staurosporine(1μM). The α1 receptor was acidified at Ser,Thr residues, and the α 1 receptor was replaced at the same level as the wild type receptor. The above results show that the inhibition effect of PMA on the current is the activation of protein C, and the mechanism of action is the inhibition effect of PMA on the current.