新しい特異的なコリンアセチルトランスフェラ-ゼ活性測定法の開発とその応用

胆碱乙酰转移酶活性测定新方法的建立及其应用

• 批准号: 03671062
• 负责人: 川島 紘一郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoritsu University of Pharmacy
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03671062/
• 关键词: コリンアセチルトランスフェラ-ゼ; 抗アセチルコリン抗体; Fonnum法; アセチルコリン; バッフィ-コ-ト

アセチルコリン(ACh)の合成酵素であるコリンアセチルトランスフェラ-ゼ(ChAT)の活性は、現在のところ主としてFonnum法(1975)により測定されている。すなわち、放射標識した〔 ^<14>C〕acetyl CoAとコリンを用いて〔 ^<14>C〕AChを合成させ、Kalignostを含む有機溶媒中に抽出して放射活性を測定する方法である。抽出段階で、種々の放射標識物質が混入する可能性が考えられ、Fonnum法には問題があると考えられる。この研究課題では当研究室で独自に作製した抗ACh抗体を用いて、新しい特異的なChAT活性の測定法の開発を試みた。まず家兎で作製した抗ACh抗血清より、抗ACh抗体を硫安分画法により調製した。家兎の血液より採取したバッフィ-コ-ト分画をホモジェネ-トし、〔 ^3H〕acetyl CoAおよびコリンと37℃で一定時間インキュベ-ションした。氷水中につけて反応を停止させ、抗ACh抗体を加えて生成した〔 ^3H〕AChを抗体に結合させた。抗体と結合した放射活性を液体シンチレ-ション法で測定した。同じサンプルをFonnum法を用いてACh合成活性を測定した。抗体に結合した〔 ^3H〕AChはサンプルのインキュベ-ション時間に比例して増大した。Fonnum法で得られた測定結果、この抗ACh抗体を用いて得られた結果とほぼ相関した。ラット脳サンプルにおいても同じ様な結果が得られた。抗ACh抗体はAChに対する特異性が高いので、この抗体と結合した放射活性はACh生成量を反映するものである。したがって家兎バッフィ-コ-トにACh生合成活性が存在することが確認された。抗ACh抗体を用いる方法は、ACh生合成活性の存在が未確認のサンプルにおいて有用な方法である。

The activity of synthetic enzyme (ACh) was determined by Fonnum (1975). The activity of the enzyme was determined by Fonnum (1975). The method for the determination of radioactivity in organic solvents has been developed by using (^ & lt;14>C) ACh to synthesize lt;14>C, and Kalignost to extract radioactivity from organic solvents. Extract segments, various radioactive tags, and mix them into each other. Test the possibility of mixing them, and test the Fonnumn method. The purpose of this study is to start the test of anti-ACh antibody by using the ChAT activity assay and the new method of ChAT activity assay. Anti-ACh antiserum, anti-ACh antibody, thioampere, thioampere, antiserum, thioampere, thioampere and thioampere. The blood samples of the family are divided into two parts, (^ 3H) acetyl CoA, and the temperature is 37 ℃ for a certain period of time. Anti-ACh antibodies were added in water to produce antigens (^ 3H) ACh antibodies. Antibody assay combined with radioactivity assay was used to determine the radioactivity of the antibody. The activity of ACh synthesis was determined by Fonnum method. Antibody binding assay (^ 3H) ACh assay showed that the ratio of peak to peak time was too high. The results of Fonnum assay and anti-ACh antibody assay were compared. Please check that the results are the same as those of the test results. Anti-ACh antibody, ACh antibody, specific antibody, antibody, radioactivity, ACh production, radioactivity, ACh production, radioactivity, anti-DNA antibody, anti-DNA antibody Please confirm that there is an error in the biosynthesis activity of ACh. There is an unconfirmed method for anti-ACh antibody and the activity of ACh biosynthesis.

项目成果

Kajiyama K,Suzuki T,Fujimoto K,Kawashima K.: "Determination of acetylcholine content and choline acetyltransferase sctivity in rabbit blood cells obtained from the buffy coat." Japanese Journal of Pharmacology. 55. 194 (1991)

Kajiyama K、Suzuki T、Fujimoto K、Kawashima K.：“从血沉棕黄层获得的兔血细胞中乙酰胆碱含量和胆碱乙酰转移酶活性的测定”。