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酵母チロシンキナ-ゼの単離・精製と細胞周期の調節における役割の解析

酵母酪氨酸激酶的分离纯化及其细胞周期调控作用分析

基本信息

批准号：
03680221
负责人：
深見泰夫
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞増殖・細胞周期の進行にはcdc2遺伝子産物が必須の働きをしていることがヒトから酵母に至る真核生物で広く観察されている。cdc2遺伝子産物はセリン/スレオニンキナ-ゼであるが、チロシンリン酸化によってその活性が制御されていることから、細胞周期の調節にチロシンキナ-ゼによるリン酸化反応が重要な役割を担っていることが考えられる。本研究では、遺伝子解析が容易な酵母を用いて、cdc2キナ-ゼの活性調節に関与する可能性のあるチロシンキナ-ゼを単離・精製し、その遺伝子をクロ-ニングすることを目的とした。これまでの予備実験として、チロシンキナ-ゼに特異的な阻害ペプチドを用いた解析から、酵母及びアフリカツメガエル卵母細胞の抽出液においてチロシンキナ-ゼ活性を同定し、また、阻害ペプチドの標的配列を利用したPCR法によって酵母チロシンキナ-ゼの候補をいくつかクロ-ン化していた。今回の実験によってアフリカツメガエル卵母細胞からは、cdc2キナ-ゼのチロシンリン酸化部位に相当するペプチドを基質とするチロシンキナ-ゼをほぼ単一にまで精製することに成功した。しかし、同様の酵素の酵母からの精製にはまだ成功していない。一方、PCR法によって得られたクロ-ンのうち最もチロシンキナ-ゼに近い配列を持つものは酵母第8染色体上にあり、第8染色体ではλファ-ジの製列クロ-ンバンクが得られていることから、PCR産物をプロ-ブにしてこのキナ-ゼ遺伝子を同定することができた。現在その全一次構造の決定、発現実験、並びに、遺伝子破壊を行なっている。

Cell proliferation, cell cycle progression, and cdc2 gene production are essential for cell proliferation and cell cycle progression. cdc2 gene product is a key component of cell cycle regulation. The purpose of this study is to analyze the gene expression in yeast and to regulate the activity of cdc2 in yeast. This preparation is carried out in the presence of specific inhibitors, such as yeast, yeast and oocyte aspirate. The activity of these inhibitors is determined in the presence of specific inhibitors, such as yeast and oocyte aspirate. The PCR method is used to identify yeast inhibitors and their candidates. This time, the oocyte was successfully purified from the substrate. The yeast of the same enzyme was refined successfully. On the one hand, the PCR method has been used to obtain the most common nucleotide sequence on the 8th chromosome of yeast, and the 8th chromosome has been used to produce the nucleotide sequence. Therefore, the PCR product can be amplified and the nucleotide sequence can be determined. Now, the decision, development, integration and evolution of the whole structure are carried out.