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ラウス肉腫ウイルスsrc遺伝子産物のドメイン構造の解析

劳斯肉瘤病毒src基因产物的结构域分析

基本信息

批准号：
60015053
负责人：
深見泰夫
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ラウス肉腫ウイルスのがん遺伝子(src)産物"p【60^(src)】"は、その遺伝子の塩基配列から導かれたアミノ酸の一次配列が明らかになっているが、その高次構造についてはほとんど研究されておらず、その機能に関しても、タンパク質リン酸化酵素の活性をもつこと以外に明確になったものはない。本研究では、p【60^(src)】の高次構造を構成するドメイン構造を理論的及び実験的に解析し、その中での機能的ドメイン(リン酸化活性部位等)との対応関係を明確にすること、またその際、機能未知のドメイン構造の存在の可能性についても明らかにすることを目的とした。そのためにまず、精製p【60^(src)】を調製し、トリプシンによる限定加水分解を行った。その結果、p【60^(src)】のもつタンパク質リン酸化活性はトリプシン耐性であるのに対し、p【60^(src)】が同時に持っていると考えられていたイノシトールリン脂質をリン酸化する活性はトリプシン感受性であった。これらの活性を担うドメインは、再構成脂質膜への結合実験からも別々のポリペプチドに存在していると考えられたので、両者の分離を試みた結果、カゼインアガロースクロマトグラフィーを行うことによって、また、抗血清を用いた免疫沈降法によっても分離可能であることが明らかとなった。一方、コンピューターを用いた理論的構造解析からは、p【60^(src)】のいくつかの構造的特徴が明らかになった。その内の1つは、p【60^(src)】の一次構造上で、すでに知られていたcAMP-依存性タンパク質リン酸化酵素(A-キナーゼ)とのホモロジーを示す領域以外の部位に、いくつかのタンパク質との局所的ホモロジーが見出されたことである。特に、A-キナーゼに次ぐ高いホモロジーを与えるものとして、ケラチン等の中間径線維タンパク質があげられる。抗ケラチン抗体を調製して行った予備的実験から、p【60^(src)】が抗ケラチン抗体と反応するという結果を得たので、現在さらに実験的検証を進めている。

The product "p [60^(src)]" is a derivative of the amino acid sequence. The primary sequence of the amino acid sequence is a derivative of the amino acid sequence. In this study, the theoretical and practical analysis of higher-order structures and their functional relationships (such as acidizing active sites) are clarified, and the possibility of their existence is unknown. The water content of the product is determined by the amount of water added. As a result, p [60 ^(src)] was found to be sensitive to lipid acidification activity and to be sensitive to lipid acidification. The activity of the lipid membrane was determined by the method of immunosedimentation. The structural analysis of the theory of a square, a square, The primary structure of the enzyme is known to be cAMP-dependent, and the enzyme is known to be cAMP-dependent, and the enzyme is known to be cAMP-dependent. Special, A- Anti-virus antibody modulation is performed in advance, and the results of anti-virus antibody anti-virus detection are obtained.