チミジンキナーゼ遺伝子導入腫瘍の化学的除去を利用した腫瘍細胞免疫原性の研究

使用化学去除胸苷激酶转基因肿瘤研究肿瘤细胞免疫原性

• 批准号: 04152064
• 负责人: 栗林 景容
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152064/
• 关键词: チミジンキナーゼ; 腫瘍; 免疫原性; 遺伝子導入; ガンシクロビル(GCV); アシクロビル(ACV)

(1)腫瘍細胞としては、同系マウスに接種したとき排除されず進行性増殖を示すSC115(DSマウス由来乳ガン細胞)およびB6UV4,1(C57BL/6マウス由来紫外線誘発腫瘍)を用いた。この2種の腫瘍細胞に、HSV II型チミジンキナーゼ(TK)遺伝子をpBR322のリコンビナントプラスミドpGR18を用いて燐酸カルシウム法により導入した。(2)TK遺伝子導入株から、抗ウイルス剤ガンシクロビル(GCV)に高感受性のクローンを複数個樹立し、in vitroでの各種抗ういるす剤感受性を解析した。その結果、代表的なクローンの50%増殖抑制を起こす薬剤濃度を親株/遺伝子導入株で比較すると、アシクロビール(ACV)についてはSC115では100μg/ml、5ug/mlB6UV4.1では10μg/ml/0.2μg/mlであり、GCVについてはSC115では100μg/ml/0.02μg/m、B6UV4.1では10μg/ml/0.005μg/mlであった。この結果から、ACVに較べGCV有効域が広く、かつ低能度でTK遺伝子導入腫瘍の増殖を抑制することが伴った。BVDU(bromovinyl deoxyuridine)はGCVと同程度に有効であったが、I型HSV治療薬であるBV-araU(arabinofuranosyl bromovinyl uracil)は無効であった。(3)TK遺伝子導入腫瘍を同系マウスに皮下接種後5日目或いは腫瘍径が10mmに達した時点から、GCV(1mg以上/マウス)を7日間連続投与することにより、腫瘍を完全に消失させることができたが、同様の処置は親株に対しては全く無効であった。GCVによりTK遺伝子導入腫瘍を排除したマウスでは、接種親株細胞を拒絶し特異的CTLが誘導されるなど、T細胞を介した特異的免疫応答が成立していた。(4)SC115は通常IFN-γ遺伝子導入・発現により造腫瘍性が低下する。しかし、なかには造腫瘍性を保持したままのクローンが存在するが、このようなクローンに追加してTK遺伝子を導入することにより、GCV投与により生体から除去することが可能であることが確認された。従って、本実験系はサイトカイン遺伝子導入によるがん治療モデルにおけるフェイルセイフシステムとしても利用できると考えられる。

(1) swollen sores cell と し て は, homologous マ ウ ス に vaccination し た と き exclude さ れ ず を sexual rights colonization in す SC115 (DS マ ウ ス origin milk ガ ン cells) お よ び B6UV4, 1 (C57BL / 6 マ ウ ス origin ultraviolet 発 swollen sores) lure を with い た. Two の こ の swollen sores cell に, HSV type II チ ミ ジ ン キ ナ ー ゼ (TK) heritage 伝 son を pBR322 の リ コ ン ビ ナ ン ト プ ラ ス ミ ド pGR18 を with い て 燐 acid カ ル シ ウ ム method に よ り import し た. (2) TK legacy 伝 son import strains か ら, resisting ウ イ ル ス tonic ガ ン シ ク ロ ビ ル (GCV) に high susceptibility の ク ロ ー ン を plural し, the in vitro で の various resistance う い る す tonic susceptibility を parsing し た. そ の results, representative な ク ロ ー ン の 50% raised colonization inhibitory を こ す 薬 tonic concentration を parent strain/son survived 伝 import strains で す quite る と, ア シ ク ロ ビ ー ル (ACV に つ い て は SC115 で は 100 mu g/ml, 5 ug/mlB6UV4. 1 で は 10 mu g/ml / 0.2 mu g/ml で あ り, GCV に つ い て は SC115 で は 100 mu g/ml / 0.02 mu g/m, B6UV4. 1 で は 10 mu mu g/g/ml / 0.005 ml で あ っ た. こ の results か ら and ACV に listed べ GCV have sharper domain が hiroo く, か つ low-energy degrees で TK legacy 伝 son import swollen sores の raised colonization を inhibit す る こ と が with っ た. BVDU(bromovinyl deoxyuridine) and <s:1> GCVと are equally effective に for type I HSV treatment であるBV-araU(arabinofuranosyl bromovinyl uracil) <s:1> and ineffective であった. (3) TK legacy 伝 son import swollen sores を homologous マ ウ ス に subcutaneous inoculation after 5 orders or い が は swollen sores diameter 10 mm に da し た point か ら, GCV (more than 1 mg / マ ウ ス) を 7 day cast and even 続 す る こ と に よ り, swollen sores を に disappear completely さ せ る こ と が で き た が, with others in の 処 buy は parent strain に し seaborne て は none く unseen で あ っ た. GCV に よ り TK legacy 伝 son import swollen sores を exclude し た マ ウ ス で は, vaccination parent strain cell を refused し specific CTL が induced さ れ る な ど, T cells を dielectric し た specific immune 応 founded a が し て い た. (4)SC115 usually, IFN-γ progeny 伝 is introduced and occurs によ, causing ulcerative が hypoplasia する. し か し, な か に は made swollen sores sex を keep し た ま ま の ク ロ ー ン が exist す る が, こ の よ う な ク ロ ー ン に additional し て TK legacy 伝 son を import す る こ と に よ り, cast with GCV に よ り raw body か ら remove す る こ と が may で あ る こ と が confirm さ れ た. 従 っ て, this be 験 department は サ イ ト カ イ ン posthumous son 伝 import に よ る が ん treatment モ デ ル に お け る フ ェ イ ル セ イ フ シ ス テ ム と し て も using で き る と exam え ら れ る.

项目成果

寺村 康史: "Herpes thymidine Rinase gene移入によるcytokine gene therapyのフエイルセイフシステム" 日本免疫学会総会・学術集会記録. 22. 337 (1992)

Yasushi Teramura：“通过疱疹胸苷冲洗酶基因转移进行细胞因子基因治疗的故障安全系统”日本免疫学会大会/学术会议记录 22. 337 (1992)。