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遺伝的組換えウイルス殺虫剤の安全性に関する研究

基因重组病毒杀虫剂的安全性研究

基本信息

批准号：
05856007
负责人：
永峰俊弘
金额：
$ 0.45万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05856007/
关键词：
ウイルス殺虫剤バキュロウイルス昆虫細胞

项目摘要

遺伝的組換えウイルス殺虫剤のモデル実験として、ポリヘドリン遺伝子をクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)遺伝子に置換した組換えAutographa californica核多角対病ウイルスを作製した。この組換えウイルスをSpodoptera frugiperda細胞に接種したところ、接種後24時間には高いCAT活性が認められた。4種の鱗翅目昆虫、ハスモンヨトウ(Spodoptera litura)、カイコ(Bombyx mori)、ヨトウ(Mamestra brassicae)、アワヨトウ(Pseudaletia separata)に組換えウイルスを接種した場合、いずれの種においてもウイルス由来のCAT活性が認められ、CATアッセイにより容易に組換えウイルスが検出できることを確認した。また、環境への残留や拡散の少ない組換えウイルス殺虫剤を創製するため、宿主である培養細胞に予め多角体蛋白質遺伝子を導入することによって、多角体蛋白質遺伝子が欠損した組換えウイルスを、多角体に包埋することを試みた。組換えウイルスには上述のウイルスを使用し、導入プラスミドには、多角体蛋白質遺伝子の全長を含んでいるプラスミド、pAcEIを用いた。選択マーカーとして、ネオマイシン耐性遺伝子のコード領域が、それぞれショウジョウバエの熱ショックプロモーターあるいはトランスポゾンcopiaのLTRに接続されたプラスミド、pUChsneoあるいはpUCcneo-2を用いた。Spodoptera frugiperda細胞にpAcEIとpUChsneoあるいはpUCcneo-2をDNA-りん酸カルシウム共沈法によって共導入し、抗生物質G-418を含む培養液で選択した後、組換えウイルスによる感染実験を行った。形質転換細胞がpUChsneoにより3株、pUCcneo-2により3株得られたが、いずれの細胞株に組換えウイルスを感染させても、多角体の形成は認められなかった。現在はその原因について検討中である。

The composition of the insect pest is controlled by autographa californica and the insect pest is controlled by Autographa californica. The activity of CAT was higher 24 hours after inoculation of Spodoptera frugiperda cells. 4 species of lepidopteran insects, such as Spodoptera litura, Bombyx mori, Mamestra brassicae, Pseudaletia separata, etc. In addition, there is a need to introduce polyhedra protein gene into cultured cells in order to create, host and environment residues, and to construct and encapsulate polyhedra protein gene. In addition to the above, the use of the gene, the introduction of the gene, the full length of the polyhedral protein gene, and the use of pAcEI There are many applications in the field of selection, selection, Spodoptera frugiperda cells were co-introduced with pAcEI and pUChsneo and infected with G-418 by DNA co-precipitation. 3 pUChsneo, 3 pUCneo-2, 3 pUCneo-2, The reason for this is that we are now in the middle of a discussion.