Generation of silkworm lacking silk gland suitable for insect factories

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本年度は、無絹糸腺カイコ作製のためのマスター候補遺伝子ノックアウトカイコの内、胚性致死となった遺伝子を除く２遺伝子（KWMTBOMO06272とKWMTBOMO15340:BmSage）について、ノックアウトホモのG1世代を育成した。KWMTBOMO06272ノックアウトカイコについては、T7ヌクレアーゼ解析により変異アレルをホモに持つことを確認した全個体で正常な吐糸が観察されたため、同遺伝子をノックアウトしても無絹糸腺カイコにはならないことが明らかとなった。一方、BmSageについては、G0作製に用いたp50系統をバックグラウンドに持つ個体で、GFPをレポーター遺伝子としてウイルス感受性を調査したが、顕著なタンパク質発現の向上は認められなかった。そこで、タンパク質高生産性系統であるf38系統への導入を試み、T7ヌクレアーゼ解析により変異アレルを持つG0個体をf38と交配し、そのF2を観察したが、無絹糸腺カイコが分離しなかった、この交配を４区繰り返したが、やはり無絹糸腺カイコが分離しなかったため、p50系統においてホモ化し無絹糸腺カイコをf38と交配し、そのF2において分離した無絹糸腺カイコにレポーター遺伝子を発現する組換えウイルスを感染させたが、明瞭なタンパク質高発現は確認されていない。また、当初は、組換えタンパク質生産に絹糸腺や絹タンパク質は不必要であり、これらに消費されるエネルギーやタンパク質の原料となるアミノ酸を外来有組換えタンパク質生産に提供できれば、より効率のよいタンパク質生産が達成できると考えていたが、絹糸腺欠失カイコにおいても顕著な体重等の増加は認められず、外見からホモ個体を判別することはできなかった。また、絹糸腺で高発言しているLong non-coding RNAを対象としたゲノム編集のためのgRNAの設計を行い、in vitroでの切断効率を確認した。