遺伝子操作による大豆アレルゲンタンパク質の遺伝的除去に関する基礎研究

基因操作去除大豆过敏原蛋白的基础研究

• 批准号: 05760005
• 负责人: 高野 哲夫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760005/
• 关键词: ダイズ; アレルゲン; エピトープ; アトピー性皮膚炎; 品質育種

ダイズ種子タンパク質の中でも主要なアレルゲンである、34KDタンパク質cDNAのクローニングを行った。34KDタンパク質の3｀末端の塩基配列と相補的なオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いてcDNAを合成した。cDNAをプラスミドベクターに組み込んで作成したミニライブラリーのクローンをランダムにとり制限酵素分析を行った。34KDタンパク質cDNAと同一と思われるクローン:1-24、2-22について部分的に塩基配列を決定し、34KDタンパク質cDNAであることが確かめられたので、全塩基配列を決定した。1-24は34KDcDNAより5｀方向に約1400bp長く、2-22は約30bp短かった。2-22の5｀側からExoIIIとMung Bean Nucleaseとを用いて約100bpおきにディレーションをおこさせたクローンのシリーズを作成し、それぞれのクローンの5｀末端の塩基配列を決定した後に、インサートを発現ベクターpRSET A、B、Cに、読み枠に従ってライゲーションした。T7RNApolymerase遺伝子を組み込んだM13を感染させることによって、各ディレーションクローンに対するポリペプチドを大腸菌で発現させた。ポリペプチドの発現はSDS-PAGEによって確認することが出来た。34KDタンパク質に対するモノクローナル抗体を用いてイムノブロットを行い、モノクローナル抗体のエピトープ部位を決定した。現在アレル-ギ-患者のIgE抗体を用いてイムノブロット行い、エピトープ構造の解析を行っている。

In the middle of the genome, there are three main types of cDNA: cDNA, cDNA, and cDNA. 34KD cDNA was synthesized from the 3 'terminal amino acid sequence of the protein. The cDNA sequence was created to limit enzyme analysis. 34KD cDNA and the same thought:1-24, 2-22 in the middle part of the base alignment is determined, 34KD cDNA and the same thought: 1-24, 2-22 in the middle part of the base alignment is determined, 34KD cDNA is determined, the whole base alignment is determined. 1-24 34KDcDNA 5 ′ direction about 1400bp long, 2-22 about 30bp short ExoIII and Mung Bean Nuclease on the 5 'side of 2-22 are used for about 100bp. After the 5' end of the 5 'end of the T7 RNA Polymerase Gene Group: M13, E. coli, E. coli SDS-PAGE was used to confirm the presence of the protein. 34KD anti-virus antibody selection and use of anti-virus antibody selection Now the patient's IgE antibody can be used to analyze the structure of IgE.