大腸菌細胞の形態形成・細胞分裂の制御機構の解析

大肠杆菌细胞形态发生和细胞分裂的控制机制分析

基本信息

批准号：
05760063
负责人：
和地正明
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760063/
关键词：
大腸菌 cafA RNaseE ams mukA カルシウム細胞周期

项目摘要

cafA遺伝子の破壊株cafA::catを構築し、その細胞分裂や染色体分配に異常がないことを落射蛍光顕微鏡により確認した。cafA遺伝子と相互作用する因子を細胞分裂変異株の中から検索した。その結果、RNaseEの変異株ams1の温度感受性がcafAプラスミドによって部分的に回復されることを見い出した。また、ams1 cafA::catの二重変異株ではその温度感受性が増強されていた。これは、CafA蛋白質がRNaseE様の活性を持つことを示唆している。さらに、mukA変異株がcafAの過剰発現により死滅することを見い出した。同様な性質を示しmukAプラスミドによって部分的に回復するM21株を新たに分離した。大腸菌の細胞周期におけるカルシウムの役割を明らかにするために、培地中のカルシウムに対して異常な反応を示す変異株を探索した。その結果、カルシウム感受性を示すCS2-29株、カルシウム依存性を示すSH3450株を分離した。CS2-29株のカルシウム感受性にかかわる変異を相補する遺伝子を、コスミドクローンを用いてクローン化した。クローン化した遺伝子をプローブとしてKoharaの大腸菌染色体整列クローンに対してハイブリダイゼーションを行うことによってマッピングした。同様に、SH3450株のカルシウム依存的増殖にかかわる遺伝子について、クローン化、マッピングを行なった。今後、得られた遺伝子の構造決定、遺伝子産物の同定を行なう予定である。さらにカルシウムに関する変異株を探索し、いくつかの候補株を得た。

构建了CAFA基因的破坏菌株，通过落叶显微镜证实了CAFA :: CAT，以确保细胞分裂或染色体分布中没有异常。在有丝分裂突变体之间搜索了与CAFA基因相互作用的因素。结果，我们发现RNASEE突变体AMS1的温度灵敏度由CAFA质粒部分恢复。此外，在AMS1 CAFA :: CAT的双重突变体中，温度灵敏度增强了。这表明CAFA蛋白具有类似RNASEE的活性。此外，我们发现MUKA突变菌株被CAFA的过表达杀死。新近分离的M21菌株表现出相似的特性并通过MUKA质粒部分回收。为了阐明钙在大肠杆菌的细胞周期中的作用，搜索了对培养基中钙异常反应的突变体。结果，分离出表现出钙敏感性的CS2-29菌株CS2-29分离出表现出钙依赖性的SH3450。使用宇宙克隆克隆了补充CS2-29菌株中钙敏感性突变的基因。克隆的基因通过杂交与Kohara大肠杆菌染色体对齐的克隆进行映射。同样，将涉及菌株SH3450钙依赖性生长的基因克隆并映射。将来，我们计划确定获得的基因的结构并识别基因产物。另外，还探索了与钙有关的突变体，并获得了几种候选菌株。