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Catabolite repression of amino acid metabolism

氨基酸代谢的分解代谢物抑制

基本信息

批准号：
22K19129
负责人：
和地正明
金额：
$ 3.99万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

ペプチダーゼ多重欠損株（Δpeps株）を用いてジペプチドの添加によって発現量が変化する遺伝子を同定するために、RNA-Seq解析用の試料調製時期の条件検討を行った。しかしながら、ジペプチド添加M9グルコース最少培地で増殖してきた細胞にはジペプチドの取り込み担体（ジペプチドパーミアーゼ）をコードするdppオペロンに変異が導入されていることが判明した。従って、この細胞からRNAを抽出してRNA-Seq解析を行ってもジペプチドの影響を正しく評価できないと判断し、新しい実験系の検討を行った。大腸菌のグルタミン要求性変異株(ΔglnA株)をM9グルコース最少培地にて培養し、ジペプチドであるアラニルグルタミンと単体のグルタミンを添加した時の細胞の増殖と、添加したジペプチド及びアミノ酸の消費速度を測定した。グルタミン源として10 mMアラニルグルタミンと10 mMグルタミンをそれぞれ単独で加えたときは、アラニルグルタミンを添加した時の方がグルタミンを添加した時よりも短いラグ時間で増殖を開始し、その後の増殖速度も速かった。この時、アラニルグルタミンはグルタミンより早く消費された。興味深いことに、10 mMグルタミンに少量(0.5 mM)のアラニルグルタミンを添加すると、10 mMアラニルグルタミン添加時と同じように増殖した。このことから、単独で加えた場合にはアラニルグルタミンはグルタミンより早く資化されること、また少量のアラニルグルタミンはグルタミンの代謝を促進することが示唆された。そこで、この条件でジペプチドにより発現の変化する遺伝子の解析を行うこととした。

The condition of sample modulation period for RNA-Seq analysis was discussed. To add M9 to the culture medium, select the carrier from the culture medium and select the dpp to be introduced. RNA extraction from the cells and RNA-Seq analysis were performed to evaluate the effects of the virus on the development of new systems. The growth, addition, and consumption rates of E. coli cells were measured when the required mutant strain (ΔglnA strain) was cultured at a minimum in M9 culture. 10 mM RCT source to 10 mM RCT source to 10 mM RCT When the time comes, the price will drop. When a small amount (0.5 mM) of 10 mM protein was added, the protein was cultured at the same time as when 10 mM was added. In this case, if you are alone, you will not be able to get rid of the problem of metabolism. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone else.