ニジマス精巣で発現しているSRY様mRNA群のcDNAクローニングと解析

虹鳟鱼睾丸中SRY样mRNA群的cDNA克隆及分析

• 批准号: 05760155
• 负责人: 神田 宏実
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760155/
• 关键词: 性決定・分化; 初期発生; 精子形成; 卵巣成熟; SRY; HMG box; 3.SRY遺伝子はY染色体に連関していることが示されているが、ニジマスゲノムのサザンブロット解析結果より、RTSOX-Te3、RTSOX-OvA、-OvB、-OvC遺伝子は雄、雌ともに存在し、Y染色体に連関しないことが示された。; SOX; 以上の解析結果は、ニジマスでは、複数種のSRY様遺伝子産物が性決定・分化に関与していることを示唆するものであり、少なくとも、今回単離したニジマスのRTSOX-Te3、RTS

我々は、魚類の性決定・分化の機構を解明することを目的として、ニジマスを用いてSRY様遺伝子の単離を開始した。本実験ではその第一歩として、未成熟ニジマス精巣で発現しているSRY様mRNA群のcDNAクローニングと解析を行ったのでその結果について報告する。1.魚類の生殖器官で発現しているSRY様mRNA群を単離するため、未成熟ニジマスの精巣及び卵巣のcDNAを用いて、哺乳類のSRY遺伝子のDNA結合領域(HMG box)のアミノ酸配列に基づいてPCRを行ったところ、精巣のみ期待される約200塩基対のDNA断片が増幅された。更に、このDNA断片サブクローニングし、得られた22クローンについて塩基配列を決定した結果、7種のSRY様HMG box配列が明らかになった。(RTSOX-Te3、-Te16、-Te29、-Te32、-Te38、-Te43、-Te49)。7種のクローンのうちRTSOX-Te43のHMG boxのアミノ酸配列は、当研究室で既に未成熟ニジマス精巣より単離され、全構造が決定されているSRY様mRNAのcDNAクローンRTSOX-LZのHMG boxのアミノ酸配列と同一であった。2.各クローンのHMG boxのアミノ酸配列を比較し、比較的相同性の低いRTSOX-Te3、-Te29及び-Te38についてmRNAの組織特異性を調べた結果、興味深いことにRTSOX-Te3は精巣で、-Te29及び-Te38は卵巣で強く発現していることが明らかになった。(1).RTSOX-Te3について、未成熟ニジマス精巣のcDNAライブラリーをスクリーニングし、RTSOX-Te3を持つcDNAクローンを単離、全構造を決定することが出来た。RTSOX-Te3は、488アミノ酸からなり、マウスSryのHMG boxのアミノ酸配列と58%の相同性があるHMG boxが存在していた。更に、このHMG boxのアミノ酸配列はマウスSox8、9、10のそれと約90%以上の非常に高い相同性を有していた。(2).RTSOX-Te29及び-Te38について、未成熟ニジマス卵巣のcDNAライブラリーよりRTSOX-Te29及び-Te38を持つcDNAクローンRTSOX-OvA及び-0vC、更に、RTSOX-Te29及び-Te38とは異なるRTSOX-OvBcDNAクローンを単離、全構造を決定した。RTSOX-OvA、-OvB、-OvCcDNAクローンは各々289、367、633アミノ酸からなり、マウスSryのHMG boxのアミノ酸配列と68%、59%、52%の相同性があるHMG boxが存在していた。 更に、RTSOX-OvBに関しては、リンパ系細胞の転写活性化因子として単離・同定されたマウスSox4と、HMG box(91%のホモロジー)に加え、C末端部分(Sox4の転写活性化領域)でも高いホモロジー(46%)を有していた。また、RTSOX-OvCに関しては、転写調節因子に特有のロイシン・ジッパー・モチーフやグルタミンに富む配列が存在し、ニジマス精巣で特異的に発現しているRTSOX-LZと構造的に非常に類似していた。

I 々は, fish sex determination and differentiation mechanism を clarification す る こ と を purpose と し て, ニ ジ マ ス を い て SRY 様 伝子 の単 里 を start し た. Hon実験ではその一歩として、Imature ニジマス精巣で発appears しているSRY様mR NA group cDNA analysis results report. 1. The reproductive organs of fishes are しているSRY様mRNA group するため、immature ニジマThe DNA binding field of SRY and SRY cDNA in mammals (HMG box) のアミノ acid sequence に づ い て を 行 っ た と こ ろ, 緣 の み さ れ る About 200 婩 対 のDNA fragment が 综合 さ れ た. Updated DNA fragments, 22 DNA fragments, 22 DNA fragments, 7 types of SRY HMG The box is equipped with が明らかになった. (RTSOX-Te3, -Te16, -Te29, -Te32, -Te38, -Te43, -Te49). 7 kinds of のクローンのうちRTSOX-Te43のHMG boxのアミノacid formula は、when the laboratory is immature ニジマス精巣より単利され、whole structure Made by SRY様mRNAのcDNAクローンRTSOX-LZのHMG boxのアミノacid formula and the same one. 2. Each クローンのHMG boxのアミノacid alignmentをComparisonし、Comparative identityのlowいRTSOX-Te3, -Te29 andび-Te38についてmRNAのtissue specificityをThe results of the adjustment, the depth of interest, the RTSOX-Te3, the essence, the -Te29 and the -Te38, the eggs, the strength, and the strength are now the same. (1).RTSOX-Te3 について, immature ニジマス精巣のcDNAライブラリーをスクリーニングし, RTSOX-Te3 holding つcDNA クローンを単, full structure をdetermination することが came out. RTSOX-Te3は、488アミノからなり、マウスSryのHMG boxのアミノacid alignmentと58%identityがあるHMG boxがexistingしていた. More and more HMG box acid combinations are available for Sox 8, 9, and 10. About 90% or more of them are very similar to each other. (2).RTSOX-Te29 and Te38 Te29, immature Te38 cDNAローンRTSOX-OvA and び-0vC, more に, RTSOX-Te29 and び-Te38 and なるRTSOX-OvBcDNA クローンを単isolation, full structure をdetermination した. RTSOX-OvA, -OvB, -OvCcDNA クローンはeach々289, 367, 633アミノ acid からなり, マウスSryのHMG BoxのアミノAcid combination is 68%, 59%, 52% identical and HMG box is present. Update, RTSOX-OvB switch, リンパ lineage cell line activator, HMG box(91%のホモロジー)に加え, C-terminal part (Sox4の転activation domain) high-definition box(46%)していた.また, RTSOX-OvC に关しては, 転WRITING REGULATION FACTOR UNIQUE のロイシン・ジッパー・モチーフやグルタミンにThe existence of the rich arrangement and the specific structure of the Nakama Seiko are very similar to the RTSOX-LZ structure.