細胞増殖および癌化におけるグルコーストランスポーター遺伝子活性化機構の解析

细胞增殖和癌变中葡萄糖转运蛋白基因激活机制分析

• 批准号: 05770100
• 负责人: 村上 尚
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770100/
• 关键词: グルコーストランスポーター; エンハンサー; SRE; SP1; AP1

培養細胞を血清などの細胞増殖因子で処理したり、また、多くの細胞の癌化に伴って、1型のグルコーストランスポーター(GT1)遺伝子の転写が増加し、それによりGT1mRNAは増加する。数の増加した細胞膜上のGT1により、細胞はより多くの糖を取り込み、細胞増殖のエネルギーとして使用する。我々はマウスのGT1遺伝子をクローニングし、遺伝子の3kb上流(エンハンサー1)と、第2イントロン中(エンハンサー2)の2ヶ所に血清添加及び、癌遺伝子のrasやsrcの産物により、活性化されるエンハンサーを同定した。そこにはSREやTREと相同性の高い配列が存在していたが、この領域だけでは転写活性化のうちの一部分しか説明できない。上流および下流から削った変異体を作成することにより、エンハンサー1の領域を約300bpにせばめた。NIH3T3培養細胞からの核抽出液を調整し、FootPrintを実施したところ、この300bpの領域にはFootPrint陽性領域が7ヶ所見いだされた。これらのFootPrint陽性領域やSRE相同配列を欠失した変異体では転写活性化能が低下した。精製したc-juu蛋白とSP1蛋白を加えたFootPrintにより、7ヶ所のFootPrint陽性領域のうち5ヶ所にc-juu蛋白が2ヶ所にSP1蛋白が結合することがわかった。また、精製したSRF蛋白を加えたFootPrintを行ったところ、NIH3T3培養細胞からの核抽出液でははっきりとしたFootPrint陽性領域としては見えなかったところにSRF蛋白が結合することがわかった。これらより、エンハンサー1では5ヶ所のAP1結合部位(TRE)と2ヶ所のSP1結合部位(GC-box)そして1ヶ所のSRF結合部位(SRE)が協同して転写活性化を行っていることがわかった。現在、エンハンサー2の解析も進めている。

The expression of GT1 gene increased when cultured cells were treated with serum cell growth factors. The number of cells on the membrane of the GT1, the number of cells on the sugar, the number of cells on the production of the use of We also determined the serum addition and the products of GT1 gene, GT2 gene, GT1 gene, GT2 gene, GT2 gene, GT3 gene, GT1 gene, GT2 gene, GT2 gene, GT3 gene, GT1 gene, GT2 gene, GT1 gene, GT2 gene, GT2 gene, GT1 gene, GT2 gene, A high degree of similarity exists between SRE and TRE, and a high degree of similarity exists between SRE and TRE. The upper and lower reaches of the river are separated into two parts. NIH 3T3 cell culture medium was adjusted, FootPrint was applied, and the 300bp region was adjusted to the 7 bp region where FootPrint was positive. The FootPrint positive field and SRE are missing in the same column. Refined c-juu protein and SP1 protein are added to FootPrint, 7-point FootPrint positive field, 5-point c-juu protein and 2-point SP1 protein binding. SRF protein binding in NIH 3T3 culture medium The AP1 binding site (TRE) of the 5-mer site and the SP1 binding site (GC-box) of the 2-mer site cooperate with the SRF binding site (SRE) of the 1-mer site to activate the 5-mer site. Now, the analysis of.

项目成果

Nishiyama,T.,Murakami,T.et al.: "Expression of the gene encoding the tyrosine kinase-deficient humaninsulin receptor in transgenic mice" Gene. in press.

Nishiyama,T.,Murakami,T.et al.：“转基因小鼠中编码酪氨酸激酶缺陷型人胰岛素受体的基因的表达”基因。