PCR法を用いたボツリヌス菌毒素の新しい検出法の確立と基礎的研究

PCR法肉毒杆菌毒素检测新方法的建立及基础研究

• 批准号: 05770191
• 负责人: 藤永 由佳子
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770191/
• 关键词: PCR; C.botulinum; botulism; toxin gene

ボツリヌス菌毒素は、血清型によりA〜G型に分類され、菌もそれに伴いA〜G型が存在する。そのうちD型とG型を除く型はヒトに中毒(ボツリヌス症)を引き起こすことが報告されている。本研究ではA〜F型のボツリヌス菌毒素を遺伝子増幅法(PCR法)を用いて直接検出する高感度で迅速、簡便な方法を確立し、さらに実際にボツリヌス中毒の原因となった食品(カラシレンコン、サケトバ)よりボツリヌス菌毒素遺伝子の検出に成功した。1.プライマーの設定現在、塩基配列が明かにされているA〜F型についてコンピュータのホモロジー検索に基づきそれぞれの型に特異的な6種類のプライマーセットを毒素の軽鎖をコードする部分に設定した。2.PCRの特異性の検定ボツリヌスA〜F型についてそれぞれ2株づつを用いて、DNAを抽出し、A型プライマーセットではA型毒素のみ、B型プライマーセットではB型毒素のみというように型特異的に検出されることを確認した。さらに無毒のボツリヌス菌((C)-AO2,(E)-Sapporo),またC.tetaniなどの他のクロストリジウム属の菌ではPCRがかからないこと(毒素特異性)を確認した。3.感度の検定A〜F型菌のDNAを抽出しそれぞれ順次10倍希釈して感度実験を行ったところ2.5pgまで検出可能であった。4.ボツリヌス中毒の原因となった食品より毒素遺伝子の検出ボツリヌス中毒の原因となったカラシレンコン、サケトバを用いて、PCRを行ったところカラシレンコンよりA型とB型、サケトバよりE型遺伝子が検出された。この結果は、これらの食品より菌を分離した結果およびマウスを用いた致死実験の結果と一致した。以上の結果より本方法は、高感度で迅速、簡便な、新しいボツリヌス症候群の診断法として有用であると結論された(投稿準備中)。

The toxin is classified into serotypes A to G, and the toxin is present in serotypes A to G. Type D and Type G, except for Type C, are toxic. In this study, A rapid and simple method for direct detection of A-F type bacterial toxins was established. In fact, the detection of A-F type bacterial toxins was successful. 1. Set the current and base configuration to be clear, type A ~ F, type B, type C, type D, type C, type C, type D, type D, type C, type D, type D 2. The specificity of PCR was confirmed by the detection of type A to F toxin, DNA extraction, type A toxin and type B toxin. The non-toxic bacteria ((C)-AO2,(E)-Sapporo), C.tetani and other bacteria belonging to the genus were confirmed by PCR. 3. The DNA of the sensitive type A to F bacteria was extracted and prepared in order of 10 times the expected sensitivity. The sensitivity was actually measured at 2.5pg. 4. The cause of toxin poisoning and the detection of toxin gene. The cause of toxin poisoning and the detection of toxin gene. The detection of toxin gene. The results of this study were consistent with those of the previous study. The results are rapid, simple, and novel.