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ボツリヌスC型、D型菌の神経毒素遺伝子およびその発現制御機構の分子生物学的解析

C型和D型肉毒杆菌神经毒素基因及其表达控制机制的分子生物学分析

基本信息

批准号：
08770192
负责人：
藤永由佳子
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770192/
关键词：
Clostridium botulinum ボツリヌス毒素 PCR neurotoxin

项目摘要

1.ボツリヌス毒素は、抗原性およびアミノ酸の一次配列より、A〜G型に分類されているが、このうちA〜F型の毒素遺伝子の軽鎖部分をPCR法を用いて型特異的に検出する方法を確立した。(武士らとの共同研究)2.血清学的方法によりC型毒素産生すると判定された5株と、D型毒素産生すると判定された4株よりtotal DNAを抽出し、上記のPCR法を用いて、存在する毒素遺伝子の型を調べた。その結果、C型5株ではすべてD型遺伝子は検出されず、C型遺伝子は3株で検出された。D型3株ではすべてC型遺伝子は検出されず、D型遺伝子は全株で検出された。3.D-SA株は、D型毒素軽鎖の抗原性とC型毒素重鎖の抗原性を持つことが知られているが、本株より毒素遺伝子を持つファージDNAを精製し、毒素遺伝子の全塩基配列を決定したところ、毒素のN端より約500残基はC型、C端より約300残基はD型とホモロジーが高く、本毒素はキメラ構造(DC型)であることが明らかになった。(森石らとの共同研究)4.C-6813株は、C型毒素軽鎖の抗原性とのD型毒素重鎖の抗原性を持つことが知られているが、同様に、毒素遺伝子の全塩基配列を決定したところ、毒素のN端側はC型、C端側はD型とホモロジーが高く、本毒素もキメラ構造(CD型)であることが明らかになった。(森石らとの共同研究)5.以上の結果より、調査した11株(血清型でC型5株、D型4株、CとDの両方に反応する型2株)はすべて1種類の毒素遺伝子を持つことがPCR法により明らかとなった。そして、CとDの両方に反応する型の2株はキメラ構造(それぞれDC型とCD型)の毒素を持つことが明らかとなった。今後は、これらの株についてサザンブロット法も行い、毒素遺伝子のコピー数などについてもより詳細に検討を行う予定である。

1. Toxin, antigenic acid, primary combination, A~G type classification, The PCR method for the toxins of the A to F types of toxins has been established using the PCR method that is specific to the type of toxins. (Joint research by Samurai Yoshino) 2. Serological methods: Type C toxin production is determined by 5 strains, D type toxin production is determined by 4 strains, total The DNA cannot be extracted, the PCR method mentioned above cannot be used, and the presence of toxin residues cannot be adjusted.そのRESULTS, type C 5 strains of ではすべて, type D with は検出されず, type C with 3 strains of で検出された. Type D has 3 plants, type C has left the whole plant, and type D has left the whole plant. 3. The antigenicity of the D-SA strain, the D-type toxin lock, and the C-type toxin heavy lock have the same antigenicity.ているが, the original strain of より杝子をholding つファージDNAを Refinedし, the toxin 缝子の全桩base blend The N-terminal residue of the toxin is approximately 500 residues, and the C-terminal residue is approximately 300 residues. The type is high, the poison is high and the structure (DC type) is high. (Joint research by Morishishi Yoshino) 4.C-6813 strain は, C-type toxin 軽肖のantigenicity とのD-type toxin heavy lock のantigenicity をhold つことが知られているが, 同様に, toxin 缝子のThe whole base arrangement is determined by the N-terminal side of the toxin, the C-terminal side of the toxin, and the D-type of the toxin.ジーが高く、本toxic もキメラ Structure (CD type) であることが明らかになった. (Joint research by Morishishi Yuno) 5. The above results showed that 11 strains of serotypes were investigated (5 strains of serotype C, 4 strains of D, C and Dの両方に濜するType 2)はすべて1 type of toxin legacy 伝子をhold つことがPCR method により明らかとなった.そして, CとDの両square に濜するtype の2 strains はキメラ structure (それぞれDC type とCD type) のtoxic をhold つことが明らかとなった. From now on, これらの区についてサザンブロット法も行い, toxin residue子のコピーnumberなどについてもより in detail and に検question を行う下注である.