皮膚悪性腫瘍におけるケラチンmRNA発現の検討(in situ hybridization法による)

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本研究を開始するにあたり、まず、標本の収集並びに皮膚悪性腫瘍におけるケラチン蛋白の発現をより深く検討することから始めた。さらに収集されたAMeX標本についても免疫組織化学的検討により、そのケラチン蛋白に構成について検討しその成果については現在投稿中である。収集された症例はBCC18例SCC10例を始め、各種皮膚上皮性悪性腫瘍に及び、総計約50例となった。平行して、ケラチンmRNAの検索をすべくinsitu hybridizationの準備にとりかかった。つまり、K1,K10,K8,K18,K19のmRNAに対する特異的なプローブの製作とそのビオチン化を行った。これらのプローブを用いて現在通常の方法に従い、mRNAの検索を正常皮膚において行っているところである。しかしながら非放射性標識プローブはその感度が放射性標識プローブに比べ著しく劣っていることや、AMeX標本におけるケラチンmRNAの保存の状態が全く不明であるため、その条件の決定に著しい困難をともなっている。現在はそのため、AMeX標本よりのmRNAの抽出によるdot blot hybridizationやNorthern blot hybridizationの施行が必要と考え、その準備にとりかかっている。又同時にin situ hybridization(組織切片上の)についても更にその条件を検討し検討を深めているところである。