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糖脂質結合型タンパク質の生合成および発作性夜間血色素尿症の病因研究

糖脂结合蛋白的生物合成和阵发性睡眠性血红蛋白尿的发病机制

基本信息

批准号：
05770803
负责人：
宮田敏男
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770803/
关键词：
発作性夜間血色素尿症 PIG-A GPIアンカー型蛋白体細胞突然変異 RT-PCR

项目摘要

発作性夜間血色素尿症(PNH)は、溶血性貧血を主徴とする後天性血液疾患である。私たちは、PNH患者由来欠損細胞株と同じ遺伝子に異常のあるヒトBリンパ球系欠損変異株を用いて、発現クローニングにより、これらの欠損変異株を正常株に転換する遺伝子PIG-Aを得た。本研究の目的は、PNH患者のPIG-A遺伝子を解析し、PIG-AがPNHの病因遺伝子であるかどうかを検討することにあった。15例のPNH患者末梢血より多形核白血球を分離し、RT-PCRによりPIG-Aの翻訳領域を増幅しアガロース電気泳動にて解析した。その結果、3例は正常より小さなサイズを示し、11例は正常と同じサイズを示した。また1例の患者では全くPIG-Aのバンドが検出されなかった。正常より小さなサイズの転写産物を示す3例の塩基配列を解析したところ、2例ともイントロンのスプライスサイトに点突然変異があることが明らかとなった。他の1例は、2番目のエクソンの3'部分が欠失した転写産物が主としてできていた。次に正常と同じサイズのPIG-A転写産物を示す11例の患者において、これらのPIG-Aが正常の活性を有するかどうかトランスフェクションにより検討したところ、活性を持つクローンと活性を持たないクローンが存在しており、それぞれ正常細胞および異常細胞由来のクローンと考えられた。このうち2例の患者については、塩基配列の解析の結果、1例ではT残基の欠失が、もう1例ではA残基の挿入が活性を持たないクローンで認められた。残りの9例についてもトランスフェクションによって求めた活性のあるクローンとないクローンの割合は、FACS解析で求めた正常PMNと異常PMNの割合と非常に高い正の相関を有しており、翻訳領域に点突然変異が存在する可能性が強く示唆された。以上、解析したすべてのPNH患者において、PIG-Aの量的あるいは質的異常を明らかにできた。この事実は、PIG-AがPNHの病因遺伝子であることを強く示唆すると考えられた。

Hemolytic anemia is the main characteristic of acquired blood disorders. The PIG-A gene was obtained from the defective cell line and the defective mutant line in the PNH patients. The purpose of this study was to analyze the PIG-A gene in PNH patients and to investigate the etiological factors of PNH. 15 cases of PNH patients with peripheral blood polymorphic leukocytes separation, RT-PCR, PIG-A and the conversion of the field to increase the amplitude of electrophoresis analysis The results showed that 3 cases were normal and 11 cases were normal. One patient was found to have lost all PIG-A status. 3 cases of base alignment analysis, 2 cases of base alignment sudden change, 3 cases of base alignment analysis, 2 cases of base alignment sudden change The first and second parts of his work are missing and the second part is missing. The PIG-A gene expression products of normal and abnormal cells were detected in 11 patients. The normal and abnormal PIG-A gene expression products were detected in 11 patients. The results of the analysis of T and A residues in 2 cases, T and A residues in 1 case, and A residues in 1 case were analyzed. 9 cases of residual PMN were analyzed by FACS to determine the activity of PMN and abnormal PMN. The results showed that there was a strong possibility of sudden change in PMN and abnormal PMN. The above analysis shows that the PNH patients are abnormal, and the quantity of PIG-A is abnormal The cause of PNH is related to PIG-A.