組換えTSHレセプター発現細胞を用いた自己免疫性甲状腺疾患の病態解析

使用重组 TSH 受体表达细胞对自身免疫性甲状腺疾病进行病理学分析

• 批准号: 05772051
• 负责人: 乾 武広
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05772051/
• 关键词: TSHレセプター; TSHレセプター抗体; 甲状腺刺激性抗体; 阻害性TSH受容体抗体; PACAP

TSHレセプター(R)の細胞外領域へのTSHやTSH(R)抗体の結合性について、lambdagt-11ファージにヒトTSH(R)cDNA[細胞外領域を150残基ずつ3部分(13〜168残基、159〜308基、299〜448残基)]を組み込んだのち、大腸菌(Y1090)に感染させガラクトシダーゼとの融合蛋白としてTSH(R)部分を作成し、標識TSHとの結合を検討したところ、TSH(R)のN端側の結合が大であった。この標識TSHの結語合抑制実験から、TSAb(甲状腺刺激性抗体)もTSBAb(阻害性TSH受容体抗体)も主にTSH(R)のN端側へ結合することを見い出した。ヒトTSH(R)cDNA(Bluescriptに入っている)を制限酵素(Bam H_1およびEcoRI)で切断し、maltose-binding protein(MBP)発現ベクター(pMALp_2 vector)に挿入した。大腸菌にてMBPとTSH(R)蛋白を融合蛋白として生成切断したのち、アミローズ結合カラムにてこの融合蛋白を精製した。酵素(Factor Xa)でMBPとTSH(R)蛋白を切断したのち、アミロ-ゼカラムでTSH(R)蛋白を単離精製した。この精製TSH(R)蛋白について^<125>I-標識TSHの結合性を検討したが、現在までのところ、陽性を見い出していない。現在、この精製されたTSH(R)に対する抗体を作成中である。次に、作成されたこのTSH(R)抗体を用いて^<125>I-標識TSHのレセプターへの結合阻止能やcAMP生成反応へN検討を予定している。ウシ甲状腺細胞膜抗体にてウサギを免疫して、TSH(R)抗体陰性でTSBAb陽性を作成し得た。このことから、ヒトの場合にもTSH(R)抗体陰性のTSBAb抗体が推定された。PACAP(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide)が甲状腺刺激抗体反応を示すことを見い出した。標識TSHの甲状腺細胞膜(R)への結合を、PACAPはほとんど抑制しないので、PACAPの甲状腺結合部位はTSH(R)と異なると推定した。

TSH レ セ プ タ ー (R) の extracellular domain へ の TSH や TSH (R) antibody の associativity に つ い て, lambdagt - 11 フ ァ ー ジ に ヒ ト TSH (R) cDNA [extracellular domain を 150 residues ず つ three parts (13 ~ 168 residues, 159 ~ 308, 299 ~ 448 residues)] を group み 込 ん だ の ち, coliform (Y1090) に infection さ せ ガ ラ ク ト シ ダ ー ゼ と の fusion protein と し て TSH (R) を made し, identifies TSH と の combining を beg し 検 た と こ ろ, TSH (R) の N end side の combining が big で あ っ た. こ の logo TSH の epilogue or inhibit be 験 か ら, TSAb (thyroid stimulating antibody) も TSBAb (resistance against sexual TSH let body antibody) も main に TSH (R) の N end side へ combining す る こ と を see い out し た. ヒ ト TSH (R) cDNA (Bluescript に into っ て い る) limitations を enzyme (Bam H_1 お よ び EcoRI) で cut し, maltose binding protein (MBP) 発 now ベ ク タ ー (pMALp_2 vector) に scions into し た. Coliform に て MBP と TSH (R) protein を fusion protein と し て generated cut し た の ち, ア ミ ロ ー ズ combining カ ラ ム に て こ の fusion protein を refined し た. Enzyme (Factor Xa) で MBP と TSH (R) protein を cut し た の ち, ア ミ ロ - ゼ カ ラ ム で TSH (R) protein を 単 from refined し た. こ の refined TSH (R) protein に つ い て ^ < 125 > I - identify TSH の associativity を beg し 検 た が, now ま で の と こ ろ, see positive を い し て い な い. Now, the refined されたTSH(R)に against する antibody を is being prepared である. に, consummate さ れ た こ の TSH (R) antibody を い て ^ < 125 > I - identify TSH の レ セ プ タ ー へ の combination can prevent や cAMP to generate the 応 beg を へ N 検 designated し て い る. Youdaoplaceholder0 thyroid cell membrane antibody にてウサギを immune <s:1> て TSH(R) antibody negative でTSBAb positive を to make た. In situations such as <s:1> と ら ら and ヒト に, the TSH(R) antibody is negative and the TSBAb antibody is が presumed to be された. PACAP(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide)が thyroid-stimulating antibody reverse 応を shows す とを とを see <s:1> た た. Identify TSH の thyroid cell membrane (R) へ の を, PACAP は ほ と ん ど inhibit し な い の で, PACAP の thyroid combining site は TSH (R) と different な る と presumption し た.

项目成果

Takehiro Inui: "80 years of Hashimoto Disease (eds.S.Nagataki,T.Mori and K.Torizuka)" Elsevier Science Publishers B.V.,Amsterdam,Netherlands, 721 (1993)

Takehiro Inui：“桥本病 80 年（eds.S.Nagataki、T.Mori 和 K.Torizuka）” Elsevier Science Publishers B.V.，阿姆斯特丹，荷兰，721 (1993)

Takehiro Inui: "Reaction of TSH and TSH receptor antibody with lambdagt 11-expression products of TSH receptor gene." LifeSci.Adv.-Exp.Clin.Endovrinol.(in press).

Takehiro Inui：“TSH 和 TSH 受体抗体与 TSH 受体基因的 lambdagt 11 表达产物的反应。”

Takehiro Inui: "Production of thyroid stimulation blocking antibody without TSH receptor binding activity in rabbits with experimental autoimmune thyroiditis" Hormone and Metabolic Research. 28(1). 5-8 (1994)

Takehiro Inui：“在患有实验性自身免疫性甲状腺炎的兔子中生产不具有 TSH 受体结合活性的甲状腺刺激阻断抗体”激素和代谢研究。

Wen Chen: "Stimulatory action of pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide(PACAP)on thyroid gland." Biochemical and Biophysical Research Communications. 194(2). 923-929 (1993)

陈文：“垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）对甲状腺的刺激作用。”