組換えTSHレセプター発現細胞を用いた自己免疫性甲状腺疾患の病態解析

使用重组 TSH 受体表达细胞对自身免疫性甲状腺疾病进行病理学分析

• 批准号: 05772051
• 负责人: 乾 武広
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05772051/
• 关键词: TSHレセプター; TSHレセプター抗体; 甲状腺刺激性抗体; 阻害性TSH受容体抗体; PACAP

TSHレセプター(R)の細胞外領域へのTSHやTSH(R)抗体の結合性について、lambdagt-11ファージにヒトTSH(R)cDNA[細胞外領域を150残基ずつ3部分(13〜168残基、159〜308基、299〜448残基)]を組み込んだのち、大腸菌(Y1090)に感染させガラクトシダーゼとの融合蛋白としてTSH(R)部分を作成し、標識TSHとの結合を検討したところ、TSH(R)のN端側の結合が大であった。この標識TSHの結語合抑制実験から、TSAb(甲状腺刺激性抗体)もTSBAb(阻害性TSH受容体抗体)も主にTSH(R)のN端側へ結合することを見い出した。ヒトTSH(R)cDNA(Bluescriptに入っている)を制限酵素(Bam H_1およびEcoRI)で切断し、maltose-binding protein(MBP)発現ベクター(pMALp_2 vector)に挿入した。大腸菌にてMBPとTSH(R)蛋白を融合蛋白として生成切断したのち、アミローズ結合カラムにてこの融合蛋白を精製した。酵素(Factor Xa)でMBPとTSH(R)蛋白を切断したのち、アミロ-ゼカラムでTSH(R)蛋白を単離精製した。この精製TSH(R)蛋白について^<125>I-標識TSHの結合性を検討したが、現在までのところ、陽性を見い出していない。現在、この精製されたTSH(R)に対する抗体を作成中である。次に、作成されたこのTSH(R)抗体を用いて^<125>I-標識TSHのレセプターへの結合阻止能やcAMP生成反応へN検討を予定している。ウシ甲状腺細胞膜抗体にてウサギを免疫して、TSH(R)抗体陰性でTSBAb陽性を作成し得た。このことから、ヒトの場合にもTSH(R)抗体陰性のTSBAb抗体が推定された。PACAP(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide)が甲状腺刺激抗体反応を示すことを見い出した。標識TSHの甲状腺細胞膜(R)への結合を、PACAPはほとんど抑制しないので、PACAPの甲状腺結合部位はTSH(R)と異なると推定した。

Extracellular Domain of TSH and TSH(R) Antibody Binding Activity of Lambdagt-11 and TSH (R)cDNA[Extracellular Domain] 150 Residues (residues 13 ~ 168, residues 159 ~ 308, residues 299 ~ 448)] The fusion protein of E. coli (Y1090) is composed of TSH(R) and TSH(R). TSH(R) and TSAb(Thyroid Stimulating Antibody) and TSBAb(TSH Inhibiting Receptor Antibody) were identified. The TSH(R)cDNA(Bluescript) was inserted into the restriction enzyme (Bam H_1 and EcoRI), and the maltose-binding protein(MBP) was inserted into the expression vector (pMALp_2 vector). E. coli MBP (R) protein fusion protein production and purification Enzyme (Factor Xa) MBP and TSH (R) protein are cut off and purified. The purified TSH(R) protein is identified by <125>I-tag TSH binding. Now, the purification of TSH(R) is in progress. In addition, the TSH(R) antibody was prepared and used to <125>identify TSH and inhibit cAMP production. Thyroid cell membrane antibody is produced by TSH(R) antibody negative and TSBAb positive. TSH(R) antibody negative and TSBAb antibody presumptive. PACAP(pituitaryadenylate cyclase-activating polypeptide) is an anti-thyroid antibody. Identification of TSH binding to thyroid cell membrane (R), PACAP inhibition, PACAP thyroid binding site TSH(R) differentiation

项目成果

Takehiro Inui: "80 years of Hashimoto Disease (eds.S.Nagataki,T.Mori and K.Torizuka)" Elsevier Science Publishers B.V.,Amsterdam,Netherlands, 721 (1993)

Takehiro Inui：“桥本病 80 年（eds.S.Nagataki、T.Mori 和 K.Torizuka）” Elsevier Science Publishers B.V.，阿姆斯特丹，荷兰，721 (1993)

Takehiro Inui: "Reaction of TSH and TSH receptor antibody with lambdagt 11-expression products of TSH receptor gene." LifeSci.Adv.-Exp.Clin.Endovrinol.(in press).

Takehiro Inui：“TSH 和 TSH 受体抗体与 TSH 受体基因的 lambdagt 11 表达产物的反应。”

Takehiro Inui: "Production of thyroid stimulation blocking antibody without TSH receptor binding activity in rabbits with experimental autoimmune thyroiditis" Hormone and Metabolic Research. 28(1). 5-8 (1994)

Takehiro Inui：“在患有实验性自身免疫性甲状腺炎的兔子中生产不具有 TSH 受体结合活性的甲状腺刺激阻断抗体”激素和代谢研究。

Wen Chen: "Stimulatory action of pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide(PACAP)on thyroid gland." Biochemical and Biophysical Research Communications. 194(2). 923-929 (1993)

陈文：“垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）对甲状腺的刺激作用。”