膜透過したタンパク質の膜からの放出に関する研究

穿过膜的蛋白质从膜中释放的研究

• 批准号: 05780431
• 负责人: 松山 伸一
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780431/
• 关键词: 大腸菌; タンパク質膜透過; Secタンパク質; リポタンパク質; 外膜

我々は、スフェロプラストを用いてタンパク質膜透過の後期段階を解析する糸を確率し、SecDが膜透過したタンパク質の膜からの放出に関与していることを示した。本年度は、SecD-deficient大腸菌のスフェロプラストを用いてタンパク質膜透過機構を解析した結果、新しい知見が得られた。araBADプロモーター支配下にsecD-secF遺伝子がクローン化されたプラスミドを保持するDELTA(secD-secF)株は、アラビノース非存在下で生育させるとSecDのみがdeficientな状態になっていた。この大腸菌ではOmpA前駆体が蓄積した。ところがこの大腸菌をスフェロプラスト化すると、OmpA前駆体の蓄積はみられず培地中へ分泌された。この結果は、SecDがなくてもOmpAの膜透過及び膜からの放出は見かけ上正常に行われることを示すと共に、ペリプラズム因子がOmpA前駆体の蓄積に関与している可能性を示唆していた。そこでペリプラズム画分存在下で同様の実験を行った結果、OmpA前駆体が蓄積した。このことより、ペリプラズム因子がタンパク質の膜透過および膜からの放出を調節していると考えられた。大腸菌主要外膜リポタンパク質(Lpp)の外膜への局在化機構は、多くの研究者の努力にもかかわらず、ほとんど明らかにされていない。スフェロプラストで合成されたLppは脂肪酸の付加とシグナルペプチドの切断を受けた成熟体として細胞質膜にとどまり、ペリプラズム画分を添加することによって膜から遊離することを見出した。Lppを細胞質膜から遊離させるタンパク質をペリプラズム画分から精製した。

I 々 は, ス フ ェ ロ プ ラ ス ト を with い て タ ン パ ク plasma membrane through late の Duan Jie を parsing す る si を probabilistic し, SecD が membrane through し た タ ン パ ク qualitative の membrane か ら の release に masato and し て い る こ と を shown し た. は this year, the SecD - deficient coliform の ス フ ェ ロ プ ラ ス ト を with い て タ ン パ ク plasma membrane through institutions を parsing し た results, new し い knowledge が must ら れ た. AraBAD プ ロ モ ー タ ー domination に secD - secF posthumous son 伝 が ク ロ ー ン change さ れ た プ ラ ス ミ ド を keep す る DELTA (secD - secF) plant は, ア ラ ビ ノ ー ス で fertility in the presence of non さ せ る と secD の み が deficient な state に な っ て い た. <s:1> coliform で で OmpA precursor 駆 が accumulation た. Youdaoplaceholder0 みられず ろが <e:1> <s:1> <s:1> coliform をスフェロプラスト すると, OmpA pro駆 <s:1> accumulate ろが みられず みられず secrete された in みられず culture. こ の results は, SecD が な く て も OmpA の membrane through and び membrane か ら の release は see か け line on normal に わ れ る こ と を shown す と に, ペ リ プ ラ ズ ム factor が OmpA 駆 body before の accumulation に masato and し て い を る possibility in stopping し て い た. Youdaoplaceholder0 を でペリプラズム is divided in the presence of で similar to the <s:1> experiment を row った results, OmpA pro駆 body が accumulates た. こ の こ と よ り, ペ リ プ ラ ズ ム factor が タ ン パ ク qualitative の membrane through お よ び membrane か ら の release を adjust し て い る と exam え ら れ た. Coliform major outer membrane リ ポ タ ン パ ク mass (Lpp) の outer membrane へ の bureau in institutions は, more く の researchers work の に も か か わ ら ず, ほ と ん ど Ming ら か に さ れ て い な い. ス フ ェ ロ プ ラ ス ト で synthetic さ れ た Lpp の は fatty acids plus と シ グ ナ ル ペ プ チ ド の cut を by け た mature body と し て cytoplasm membrane に と ど ま り, ペ リ プ ラ ズ ム draw points を add す る こ と に よ っ て membrane か ら free す る こ と を shows し た. The cytoplasmic membrane of Lppを ら free させるタ パ パ granular substance をペリプラズム fractions ら ら refined た た.

项目成果

S.Matsuyama: "Biochemical analyses of components comprising the protein translocation machinery of Escherichia cob." Membrane biogenesis in prokaryotes. (印刷中).

S. Matsuyama：“原核生物膜生物发生的构成成分的生化分析”。

松山伸一: "大腸菌膜" 膜学実験シリーズ 第1巻 生体膜編. 1. 90-93 (1994)

松山真一：《大肠杆菌膜》膜科学实验系列第1卷生物膜版。1. 90-93 (1994)

S.Matsuyama: "SecD is involved in the release of translocated secretory proteins from the cytoplasmic membrane of Escherichia cob." EMBO J.12. 265-270 (1993)

S.Matsuyama：“SecD 参与从大肠杆菌细胞质膜释放易位分泌蛋白。”

松山伸一: "大腸菌のタンパク質膜透過装置" 日本農芸化学会誌. 68. 212-221 (1994)

Shinichi Matsuyama：“大肠杆菌的蛋白质膜渗透装置”日本农业化学学会杂志 68. 212-221 (1994)。