RNAポリメラーゼ中に存在するRNA分解酵素様ドメインの合成化学的研究

RNA聚合酶中RNase样结构域的合成化学研究

• 批准号: 05780419
• 负责人: 北條 裕信
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780419/
• 关键词: システイン含有タンパク質; Npysアミノ酸; トリメチルベンジル基; バルナーゼ様ドメイン

調書通り、筆者が開発したタンパク質合成法を用いて、RNAポリメラーゼ中に存在するバルナーゼ様のドメイン、RPSc(1-112)の合成を行った。まず、RPSc(1-112)のペプチド鎖を4つに分割し、それぞれのペプチドセグメントを固相法により合成した。システイン残基を含まないセグメントは、従来法通りBocアミノ酸を用いる固相法により調製した。システイン残基を含むものについては、チオール基の保護が必要となるため、新たな調製法の開発を行った。幾つかの方法を検討した結果、3-ニトロー2-ピリジンスルフェニル(Npys)アミノ酸を用いる固相法により、チオール基を2、4、6-トリメチルベンジル(Tmb)基で保護したセグメントを調製することができた。ついで、筆者の開発した縮合法を用いてセグメント同士を順次縮合した。得られた保護ペプチドをフッ化水素処理してTmb基を除去した後、HPLCにより精製し、目的物RPSc(1-112)を得た。目的物はアミノ酸分析、質量分析により確認することができた。以上のように、システイン残基含有セグメントの調製法を確立できたことにより、筆者の開発した方法を用いて、システイン含有タンパク質の合成が可能となった。続いて、第2の研究目的であるRPSc(1-112)のRNase活性の有無を検証した。バルナーゼの活性測定の手順に従い、RPSc(1-112)の酵素活性の測定を試みた。しかし、RPSc(1-112)は活性測定条件下で綬衝溶液にまったく溶解せず、現在の所、RNase活性を見いだすまでには至っていない。今後このドメインをRNAポリメラーゼ中の本来のコンフォメーションに再生する方法について検討し、その条件下で酵素活性を測定したいと考えている。

Tong り book, the author が open 発 し た タ ン パ ク quality synthesis を い て, RNA ポ リ メ ラ ー ゼ に exist す る バ ル ナ ー ゼ others の ド メ イ ン, RPSc line (1-112) の synthetic を っ た. ま ず, RPSc (1-112) の ペ プ チ ド lock を 4 つ に し, そ れ ぞ れ の ペ プ チ ド セ グ メ ン ト を solid-phase method に よ り synthetic し た. シ ス テ イ ン residues を containing ま な い セ グ メ ン ト は, 従 to pass り bok ア ミ を ノ acid with い る solid-phase method に よ り modulation し た. シ ス テ イ ン residues を containing む も の に つ い て は, チ オ ー ル base の が necessary protection と な る た め, new た な modulation method is の open 発 を line っ た. A few つ か の way を beg し 検 た results, 3 - ニ ト ロ ー 2 - ピ リ ジ ン ス ル フ ェ ニ ル (Npys) ア ミ を ノ acid with い る solid-phase method に よ り, チ オ ー ル を 2, 4, 6 - ト リ メ チ ル ベ ン ジ ル (Tmb) で protection し た セ グ メ ン ト を modulation す る こ と が で き た. The author developed the た condensation method of を and used the を てセグメ ト ト ト to successively condense the を with を. Have ら れ た protection ペ プ チ ド を フ ッ chemical water element 処 Richard し て Tmb base を remove し た, HPLC after に よ り refined し, purpose RPSc た を (1-112). The acid analysis and mass analysis of the target substance ア ア ノ confirm する する とがで た た た た. Above の よ う に, シ ス テ イ ン residues containing セ グ メ ン ト を の regulation law establish で き た こ と に よ り, the author の 発 し を た method with い て, シ ス テ イ ン contains タ ン パ ク qualitative の synthetic が may と な っ た. Youdaoplaceholder0 続 て て, the second <s:1> research objective であるRPSc(1-112) <s:1> RNase activity <e:1> whether there is を検 evidence た た. Youdaoplaceholder0 ナ ナ ゼ ゼ ゼ <s:1> activity determination <e:1> follow the に従 に従 sequence and RPSc(1-112) <s:1> enzyme activity <s:1> determination を test みた. し か し, RPSc (1-112) は activity determination conditions で ribbon flush solution に ま っ た く dissolved せ ず, now see what の, RNase activity を い だ す ま で に は to っ て い な い. Future こ の ド メ イ ン を RNA ポ リ メ ラ ー ゼ の の originally in コ ン フ ォ メ ー シ ョ ン に regeneration す る method に つ い て beg し 検, そ の を で enzyme activity under the condition of determination し た い と exam え て い る.

项目成果

Hironobu Hojo: "Development of a Method for Protein Synthesis Using S-Alkyl Thioester of a Partially Protected Peptide Segments" (佐藤印刷), 100 (1994)

Hironobu Hojo：“开发使用部分受保护肽段的 S-烷基硫酯进行蛋白质合成的方法”（佐藤印刷），100 (1994)