I型コラーゲンの細胞接着部位を有するモデルペプチドの合成と人工皮膚への応用

具有I型胶原细胞粘附位点的模型肽的合成及其在人造皮肤中的应用

基本信息

批准号：
11780632
负责人：
北條裕信
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780632/
关键词：
コラーゲンモデルペプチド人工皮膚ペプチドチオエステル

项目摘要

近年、コラーゲンは、細胞の接着、増殖、分化などの細胞活動のコントロールに関与していることが明らかとなってきた。生体内のコラーゲンのほとんどを占めるI型は、同じα1(I)鎖2本と、α2(I)鎖の3本鎖が絡み合って三重らせん構造を形成している。従来、I型コラーゲンの細胞接着部位の特定には、α1(I)鎖のみからなるホモ三量体が用いられ、(433-441)など幾つかの配列が候補としてあげられてきた。しかし、細胞がコラーゲンの立体構造を認識して接着しているとすれば、ホモ三量体ではなく、実際のI型コラーゲンと同様ヘテロ三量体に対する接着能を評価する必要がある。昨年度の本研究では、細胞接着部位(433-441)のより精密なモデルとして、α1鎖2本、α2鎖1本からなるヘテロ三量体の合成を行った。そこで、このペプチドのマウス繊維芽細胞L929に対する細胞接着能を解析した。まず、ペプチドを30℃で96穴のプレートに0.1μM〜50μMの濃度で吸着させた。ついで、L929細胞を1プレートあたり2x10^4個加えて1.5時間吸着させた。その後、プレートに吸着した細胞数をMTTアッセイ法により計測した。同様の実験を市販のI型コラーゲン、(Pro-Hyp-Gly)_6についても行った。その結果、市販のI型コラーゲンは、0.01μMの低濃度から強い吸着が見られたのに対し、(433-441)の配列を含むペプチド、(Pro-Hyp-Gly)_6は、50μMの高濃度に至るまで、接着した細胞数は、I型コラーゲンの10分の1程度であった。以上の結果から、Barnesらによって指摘されているように、この部位の細胞接着能については、再検討を要する結果となった。今後、他の細胞接着部位についても同様にヘテロ三量体を合成し、その細胞接着能を検証して行く予定である。また、その部位を用いた新規の人工皮膚への応用もめざして行きたい。

近年来，已发现胶原蛋白参与控制细胞活性，例如细胞粘附，增殖和分化。 I型，它是体内大多数胶原蛋白的I型，与两个相同的α1（i）链和三个α2（i）链纠缠在一起，形成了三重螺旋结构。通常，仅由由α1（i）链组成的同构元素已被用于识别I型胶原蛋白的细胞粘附位点，并且已将几个序列（例如（433-441））称为候选物。但是，如果细胞识别并遵守胶原蛋白的三维结构，则有必要评估它们的粘附能力，类似于实际I型胶原蛋白。在去年的这项研究中，我们合成了由两个α1链和一个α2链组成的异质体，作为细胞粘附位点的更精确模型（433-441）。因此，分析了该肽对小鼠成纤维细胞L929的细胞粘附能力。首先，将肽在30°C的96孔板上吸附在0.1μm至50μm的浓度下。然后，每盘添加2x10^4 L929细胞，并吸附1.5小时。之后，通过MTT测定法测量了吸附在板上的细胞数量。还对市售的I型胶原蛋白（Pro-Hyp-Gly）_6进行了类似的实验。结果，发现市售的I型胶原蛋白的强烈吸附来自低浓度为0.01μm，而（433-441）肽（Pro-Hyp-Gly）_6）含有序列（433-441）的高浓度（433-441）。从上面的结果中，如Barnes等人所指出的那样，需要重新检查该站点的细胞粘附能力。将来，我们计划类似地合成其他细胞粘附部位的异聚二聚体并验证其细胞粘附能力。我们还旨在使用该区域将其应用于新的人造皮肤上。