分子生物学的手法と高次構造解析による情報伝達機構の解析

利用分子生物学方法和高阶结构分析分析信息传递机制

• 批准号: 05780525
• 负责人: 山根 和彦
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780525/
• 关键词: EGFレセプター; NMDAレセプター; mas; バキュロウィルス; 大量精製; P-糖タンパク質

本研究の目的は、生体膜を介した情報伝達の問題を解明するために、いくつかの情報伝達に関与する重要な膜蛋白質を遺伝子工学によって大量生産し、構造解析に供することである。まず、バキュロウィルスと昆虫の細胞培養系を用いて、グルタミン酸受容体(NMDAレセプター)、mas癌遺伝子産物(アンジオテンシンレセプター)などいくつかの重要な情報伝達に関与する膜蛋白質の大量生産を試みた。筆者が用いた系は目的遺伝子と同じ転移プラスミド上にbeta-ガラクトシダーゼ遺伝子を組み込んであり、beta-ガラクトシダーゼ活性を指標に組み替え体ウイルスを選別する系である。まず、EGFレセプター遺伝子、NMDAレセプ夕一遺伝子、mas癌遺伝子産物をこの転移プラスミドにクローニングした。これらのプラスミドと直線化したバキュロウィルスDNAとをコトランスフェクションを行い、組換え体ウイルスを選択できた。EGFレセプターにおいてはEGF結合活性を示すプラークが得られた。ただし、量的には従来培養細胞などから得られる量と比べて多くなく、二次元結晶化に供するほどの量が得られなかった。NMDAレセプター、mas癌遺伝子産物においては現在、発現をチェック中である。また、P糖タンパク質の一部分をこのパキュロウイルスの系で生産したところ、バクテリアの系に比べて100分の1ほどしか蛋白質を生産しないことがわかった。このことから系全体を見直し、メタノール資化性菌を使った強力な真核細胞の発現系を平行して使用し、大量発現に道を開こうとしている。

The purpose of this study is to clarify the relationship between information transmission and important membrane protein transmission engineering, mass production and structural analysis. The application of insect cell culture systems in the field of biological and chemical engineering, the development of NMDA receptors, mas oncogene products, and the mass production of membrane proteins. The author uses the target gene to select the beta-, beta-. NMDA, EGF, NMDA, MAS, NMDA, NMDA, This is the first time I've ever been able to do this. EGF binding activity was detected in the cells. For example, the amount of water used to culture the cells is higher than that of the amount of water used to culture the cells. NMDA is a cancer gene product. A portion of the protein is produced in a variety of ways, such as by adding 100 parts of protein to the protein system. The development of eukaryotes in parallel with the development of eukaryotes in large numbers is a matter of general concern.