プロテインA-ホタルルシフェラーゼ融合タンパク質の作製と高感度免疫測定への応用

Protein A-萤火虫荧光素酶融合蛋白的制备及其在高灵敏免疫分析中的应用

基本信息

  • 批准号:
    05750710
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.58万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1993
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1993 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究では、プロテインAとホタルルシフェラーゼが活性のイブリッドを形成するように遺伝子レベルで分子設計を行い、融合タンパク質を作製するとともにその有用性を明らかにした。プロテインAは黄色ブドウ球菌由来の膜タンパク質で、免疫グロブリン(IgG)のFc部位と特異的に結合できる性質を有する。一方、ホタルルシフェラーゼはルシフェリンの酸化反応を触媒する酵素で、この際に発光反応を伴う。発光はフォトンカウンティングによりきわめて高感度に検出できる。プロテインAの構造遺伝子に、ホタル由来のルシフェラーゼ遺伝子を連結して融合遺伝子発現プラスミドを構築した。このプラスミドにより大腸菌の形質転換を行い、プロテインA-ルシフェラーゼ融合タンパク質を生産した。得られた融合タンパク質は、プロテインAの性質、すなわちIgGへの結合能力とルシフェラーゼの酵素活性を有する新規な多機能タンパク質であることが明らかになった。さらに、この融合タンパク質を用いて、ヒトIgGの酵素免疫測定を行った。その結果、極微量(ナノグラムオーダー)のタンパク質の定量分析を行えることが明らかとなり、高感度免疫測定に適用できる可能性が示唆された。
In this study, the activity of では, プロテインA とホタルルシフェラーゼがActive のイブリッドをformation するように伝The molecular design of the sub-molecule is as follows, and the quality of the fused material is as follows: the usefulness of the product. The プロテインA yellow ブドウ coccus is derived from the membrane タンパク quality and the immune グロブリン (IgG) specific に binding and できる properties の Fc site. One side, ホタルルシフェラーゼはルシフェリンのacidification reaction を catalyst する enzyme で, この に発 light reaction を companion う.発光はフォトンカウンティングによりきわめてHigh sensitivityに検出できる. The プロテインAのstructural legacy 伝子に, the ホタル origin のルシフェラーゼ legacy 伝子をconnection して fusion legacy 伝子発existing プラスミドを CONSTRUCTION した.このプラスミドにより coliform morphological change を row い, プロテインA-ルシフェラーゼfusion タンパクquality を production した. Obtained られたfusion タンパク性は, プロテインA's nature, すなわちIgG's へのcombination ability とルシフェラーゼのEnzyme activity を有する新码な Multifunctional enzyme であることが明らかになった.さらに, このfusion タンパクquality を いて, ヒトIgG のenzyme immunoassay を行った.そのResults, Quantitative analysis of very trace amounts (ナノグラムオーダー) of the quality The possibility of application of high-sensitivity immunoassay and the possibility of application of ることが明らかとなり is indicated.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
E.Kobatake et al.: "Bioluminescent Immunoassay Using a Genetically Fused Protein A-Luciferase" J.Biolum.Chemilum.8. 92- (1993)
E.Kobatake 等人:“使用基因融合蛋白 A-荧光素酶的生物发光免疫测定”J.Biolum.Chemilum.8。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
E.Kobatake et al.: "Bioluminescent Immunoassay with a Protein A-Luciferase Fusion Protein" Anul.Biochem.208. 300- (1993)
E.Kobatake 等人:“使用蛋白 A-荧光素酶融合蛋白进行生物发光免疫测定”Anul.Biochem.208。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
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