有用二次代謝産物の細胞外漏出および連続生産を可能とする植物毛状根の培養

培养植物毛状根，使细胞外渗漏并持续产生有用的次生代谢产物

• 批准号: 05750717
• 负责人: 紀ノ岡 正博
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05750717/
• 关键词: 生物化学工学; バイオリアクター; 天然有用物質生産; 植物細胞培養; 植物毛状根; 連続生産; 赤ビ-ト毛状根; 色素生産

本研究では,有用物質を細胞外に漏出回収する連続生産型バイオリアクターの開発を目的とし培地循環型バイオリアクターを用い,種々の条件下で赤ビ-ト毛状根を培養し以下の知見を得た送液ポンプは,本リアクターにおいて培地を循環するために購入した.1.培地循環型バイオリアクターは,増殖カラムと酸素富化槽からなり,増殖カラム内では毛状根を固定しカラム内の入口から出口方向に培養液を流すことによって増殖させる.一方,酸素富化槽では,空気を通気し攪拌することで槽内部における培養液の溶存酸素を,一定に保ちカラム内に供給する.本バイオリアクターを用いカラム内空塔速度を種々変化させ培養を行なったところ空塔速度の上昇とともに細胞増殖速度が向上した.さらに,カラム内での酸素移動の解析により培養液(液)と毛状根(固)間に存在する境膜で酸素移動律速となり細胞増殖が支配されていることが明らかになった.2.培地循環型バイオリアクターで高密度培養を行なった際にも,増殖カラム内において毛状根の酸素摂取により溶存酸素の濃度勾配が生じ,カラム内培養液入口では溶存酸素が十分に存在するため細胞増殖が行われ,培養液出口付近では溶存酸素がゼロ(酸素飢餓状態)となり色素を細胞内から連続的に漏出することを見出した.さらに,高分子吸着樹脂を用いた本リアクター中の漏出色素をインラインで吸着回収することができた.3.細胞増殖および色素漏出・回収を伴う赤ビ-ト毛状根の高密度培養を試みたところ,培養液の空塔速度2.7m/h,培養期間674hにおいて,細胞増殖速度が6.7g/(m^3・h),色素生産速度が8.1×10^<-3>g/(m^3・h)となり,培地循環型バイオリアクターで連続かつ長期的に二次代謝産物生産を行えることが明らかとなった.

This study で は, useful substances を extracellular に leaking back 収 す る even 続 production-oriented バ イ オ リ ア ク タ ー の open 発 を purpose と し petty circular バ イ オ リ ア ク タ ー を い, kind of 々 で red ビ の conditions - を ト hairy root culture under し の knowledge を have た send liquid ポ ン プ は, this リ ア ク タ ー に お い て petty を cycle す る た め に buy し た. 1. The petty circular バ イ オ リ ア ク タ ー は, raised colonization カ ラ ム と acid element enrichment tank か ら な り, raised colonization カ ラ ム within で は hairy root を fixed し カ ラ ム の entry within か ら export を flow direction に cultures of す こ と に よ っ て raised colonization さ せ る. Element enrichment, acid tank で は, empty 気 を tong 気 し mixing す る こ と で tank internal に お け の る cultures of soluble acid element を, certain に protect ち カ ラ ム に supply す る. This バ イ オ リ ア ク タ ー を with い カ ラ of superficial velocity を ム 々 variations change さ せ line cultivate を な っ た と こ ろ superficial velocity rising の と と も に cells raised が colonization speed up し た. さ ら に, カ ラ ム within で の acid element mobile の parsing に よ り nutrient solution (liquid) と hairy root (solid) に exist between す る で acid membrane element movement law of velocity boundary と な り cells raised colonization が dominate さ れ Youdaoplaceholder0 て る とが とが Ming ら になった になった.2. Petty circular バ イ オ リ ア ク タ ー で line high density cultivation を な っ た interstate に も, raised colonization カ ラ ム within に お い て hairy root element, take に の acid よ り soluble deposit concentration of acid element の hook with が じ, カ ラ ム entrance in the culture medium で は solution of acid element が very に exist す る た め cell line raised colonization が わ れ, culture exports nearly で は soluble deposit acid element が ゼ ロ acid (hungry) と な り を pigment cells か ら even 続 に leakage す る こ と を shows し た. さ ら に, polymer sorption resin by い を た this リ ア ク タ ー の leak out the pigment を イ ン ラ イ ン で sorption back 収 す る こ と が で き た. 3. Cells raised colonization お よ び pigment leakage, back 収 を with う red ビ - ト hairy root の high-density cultivation を try み た と こ ろ, culture の superficial velocity 2.7 m/h, cultivate during 674 h に お い て, cells raised colonization rate が 6.7 g/(m ^ 3 h.), pigment production speed が 8.1 * 10 ^ < - > 3 g/(m ^ 3 · h) と な り, culture to follow Ring バ イ オ リ ア ク タ ー で even 続 か つ long-term に secondary metabolites production line を え る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

Masahiro Kino-oka: "Effect of Oxygen Transfer on Culture of Red Beet Hairy Roots in Medium-Circulating Bioreactor" 化学工学会第26回秋季大会要旨集 第3分冊. 92- (1993)

Masahiro Kino-oka：“氧气转移对介质循环生物反应器中红甜菜毛状根培养的影响”化学工程师学会第 26 届秋季会议摘要，第 3 卷 92-（1993 年）

Masahito Taya: "High Cell Density Culture of Hairy Roots for Plant-Derived Metabolite Production in Bioreactor" Proceedings of Sixth European Congress on Biotechnology. 376- (1993)

Masahito Taya：“生物反应器中用于植物衍生代谢物生产的毛状根的高细胞密度培养”第六届欧洲生物技术大会论文集。

Masahiro Kino-oka: "Investigation of Oxygen Transfer on Culture of Plant Hairy Roots in Bioreactor" Proceeding of Asia-Pacific Biochenical Engineering Conference 1994. (発表予定). (1994)

Masahiro Kino-oka：“生物反应器中植物毛状根培养的氧转移研究”1994 年亚太生物化学工程会议论文集。（预定报告）。

紀ノ岡正博: "植物毛状根培養におけるバイオリアクター中での酸素移動速度の解析" 化学工学会第59年会講演要旨集. (発表予定). (1994)

Masahiro Kinooka：“植物毛状根培养生物反应器中的氧转移率分析”化学工程师学会第 59 届年会论文集（待提交）。