分泌型遺伝子(Se gene)のクローニング

分泌基因（Se基因）的克隆

• 批准号: 05857052
• 负责人: 神田 芳郎
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857052/
• 关键词: 糖転移酵素; Lewisフコシルトランスフェラーゼ; 血液型; Lewis陰性遺伝子

分泌液や消化管粘膜で、ABO血液型の発現を決定する分泌型遺伝子(Se gene)をクローニングする予定で、胃粘膜よりcDNAを合成しExpression cloningを進行中であるが、いまだ目的の遺伝子は単離できていない。しかしながら、今回集めた胃粘膜4例のうち2例が、ABO血液型と関連したLewis血液型陰性個体のものであった。Lewis遺伝子によってコードされているalpha(1,3/1,4)fucosyltransferase[(3/4)FT]はすでに単離されているが、約10%の割合で存在するLewis陰性遺伝子は、それまで報告されていなかった。Northernblot解析より、Lewis陰性個体も本遺伝子を発現していること確認したので、Lewis陽性ならびに陰性個体からPolymerase chain reaction法を用いて(3/4)FT遺伝子の蛋白翻訳部位のcDNAをクローニングしシークエンスした。その結果1例のLewis陰性cDNAは開始コドンのAから59番目のTがGに、508番目のGがAに置換していることがわかった。そこでこのcDNAを真核細胞発現ベクターpCDM8に組み込み、(3/4)FT cDNAをtransfectするとLewis抗原を新たに発現することがすでに調べられているCOS細胞に発現させLewis抗原の発現を調べたところLewis陰性個体のcDNAをCOS細胞にtransfectしてもLewis抗原は発現しなかった。そこで、59番目と508番目どちらの塩基置換でLewis抗原の発現ができなくなったのかを調べるために59番目のみの塩基置換と508番目のみの塩基置換をもつキメラcDNAを作成しCOS細胞にtransfectしたところ508番目のみの塩基置換をもつcDNAだけがLewis抗原を発現できなかった。以上のことから、508番目のGからAへの置換が、Lewis陰性遺伝子の本体であることが示唆された。現在59番目と508番目の塩基置換の頻度や508番目の塩基置換以外のLewis陰性遺伝子を研究中である。

Secretion, digestive tract mucosa, ABO blood type development, determination of secretory gene (Se gene), pre-determined, gastric mucosa cDNA synthesis, Expression cloning, in progress, target gene separation. 4 cases of gastric mucosa, 2 cases of ABO blood type, Lewis blood type negative individuals Lewis negative gene is reported in alpha(1,3/1,4)fucosyltransferase[(3/4)FT], which is present in about 10% of the cleavages. Northern blot analysis of the cDNA of the protein translation site of the FT gene was performed using the Polymerase chain reaction method in Lewis positive and Lewis negative individuals. The results showed that 1 case of Lewis negative cDNA started to change from A to G at 59 and G to A at 508 Therefore, this cDNA is included in the eukaryotic expression vector pCDM8,(3/4)FT cDNA is transferred, and Lewis antigen is newly expressed. Therefore, the expression of Lewis antigen is regulated in COS cells, and the expression of Lewis antigen is regulated in COS cells from Lewis-negative individuals. The Lewis antigen was produced by gene transfer in COS cells. The Lewis antigen was produced by gene transfer in COS cells. The above is the 508 th paragraph of the G At present, the frequency of 59 - 508 base substitutions and Lewis negative genes other than 508 base substitutions are under study.

项目成果

Yoshiro Koda: "Analysisi of Lewis Fucosyltransferase Genes From the Human Gastric Musosa of Lewis‐Positive and‐Negataive Individuals" Blood. 82. 2915-2919 (1993)

Yoshiro Koda：“刘易斯阳性和阴性个体胃粘膜的刘易斯岩藻糖基转移酶基因分析”血液。 82. 2915–2919 (1993)