慢性圧負荷における心筋細胞筋小胞体Ca^<2+>ATPaseの転写調節In vivo gene injectionによる検討

慢性压力超负荷时心肌细胞肌浆网Ca^2+ATP酶的转录调控体内基因注射研究

• 批准号: 05857080
• 负责人: 青柳 昭彦
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857080/
• 关键词: 筋小胞体Ca^<2+>ATPase; 圧負荷心肥大; in vivo gene injection

SR Ca2_+ ATPase promoter にluciferase 構造遺伝子をfusion したconstructはUniversity of Vermont, Dr. Periasamy より供給された。SR Ca^<2+> ATPase promoter 部分にdeletion mutation を加え-1110kb, -658kb, -284kb, -267kb, -72kbからのみとした5種類のconstructをも用いた。gene transfer の効率に対する補正のため市販のpSV-betagal plasmid を用いた。まず、大動脈狭窄術後、組織摘出までの示適期間を決定するため-1110SR Ca2_+ ATPase-luciferase 10 mg をpSV-beta-gal plasmid 10 mg とともに in vivo gene injection した。beta galactosidase 活性は、gene injection を行なった左心室心尖部で行なわなかった心基部にくらべ1週間後に1.3倍、5週間後に1.9倍と安定した発現を認めた。luciferase 活性は、左心室心尖部で心基部にくらべ1週間後に250倍、2週間後に33倍、3週間後に27倍、4週間後に31倍、5週間後に13倍と少なくとも5週間は持続するが、徐々に減衰する発現を認めた。現在、200g のラットにSR Ca2_+ ATPase promoter -1110kb - luciferaseをpSV-bgal plasmid と左心室心尖部にin vivo injection し2日後に上行大動脈狭窄術(内経1.6mm) を行ない、1週間後に心臓を摘出し左心室心筋組織でShamoperation 群との間にluciferase 活性の違いがあるか検討中である。当初、in vivo gene injection と上行大動脈狭窄術を同時に施行したが、過半数の個体が術中ないし術直後に死亡し、かつ手術生存例の術後1週間の経過観察でも恐らく心不全と思われる死亡があり、二段階に分けて手術を行なうこととした。このことが、本研究の遂行をやや遅らせている。

SR Ca2_+ ATPase promoter luciferase gene fusion construct University of Vermont, Dr. Periasamy SR Ca^<2+> ATPase promoter is divided into deletion mutation and-1110kb, -658kb,-284kb,-72kb. gene transfer efficiency correction and pSV-betagal plasmid application The appropriate duration of tissue extraction after surgery for coronary artery stenosis was determined by pSV-beta-gal plasmid 10 mg and pSV-beta-gal plasmid 10 mg. beta galactosidase activity increased by 1.3 times in 1 week and 1.9 times in 5 weeks after gene injection. Luciferase activity was 250-fold, 33-fold, 27-fold, 31-fold, and 13-fold lower in left ventricular apex at 1 week, 2 weeks, 3 weeks, and 5 weeks, respectively. At present, 200g of SR Ca2 + ATPase promoter -1110kb - luciferase pSV-bgal plasmid was injected into the left ventricular apex in vivo. Two days later, ascending aortic stenosis (1.6 mm in diameter) was performed. One week later, the heart was extracted from the left ventricular tendon tissue. At the beginning, in vivo gene injection and ascending aortic stenosis were performed simultaneously, and more than half of the individuals died during and after surgery. In the case of surgical survival, the patient was over-examined one week after surgery, and the patient died due to fear of cardiac insufficiency. This study was carried out in the first place.