慢性圧負荷における心筋細胞筋小胞体Ca^<2+>ATPase転写の検討:慢性圧負荷反応領域のin vivo gene injectionによるマッピング及びpromoter結合蛋白(AP1,Sp1)の検討

慢性压力超负荷期间心肌细胞肌浆网 Ca^<2+>ATPase 转录的检查:通过体内基因注射和启动子结合蛋白(AP1、Sp1)检查绘制慢性压力超负荷反应区域

基本信息

  • 批准号:
    06807060
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.15万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1994
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1994 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

心筋細胞の筋小胞体(SR)Ca^<2+>ATPaseは、拡張期に細胞質のCa^<2+>をSR内に取り込むことにより拡張機能に関与し、またSR内に蓄積されているCa^<2+>量が収縮期にSRから放出されるCa^<2+>量を規定することにより収縮機能に関与している。このSRCa^<2+>ATPaseは非代償性圧負荷心肥大など種々の不全心筋において発現レベルが低下し、SR vesicleあたり又は単位心筋重量あたりの酵素活性が低下することが知られている。我々は、in vivoの系におけるSR Ca^<2+>ATPase発現調節の機序の研究の一環として、SRCa^<2+>ATPase gene promoter領域を、そのdeletion mutantのラット心筋へのin vivo gene transferにより、検討した。ラットを麻酔・呼吸管理下に開胸し、左室心尖にSR Ca^<2+>ATPase promoter領域-1110bpまでとluciferase reporter geneのfusion plasmid 10μgを28 gauge針で注入した(in vivo gene transfer)。1-5週間後に左室心尖部心筋homogenateのluficerase assayを行い、SRCa^<2+>ATPase promoter activityの指標とした。次に、SR Ca^<2+>ATPase promoter領域にdeletionを加え-658bp、-284bp、-267bp、-72bpまでとしluciferasegeneをfusionしたplasmidを、同様にラット左室心筋に注入し1週間後に心筋luciferase活性を測定した。In vivo gene transferの1、2、3、4、及び5週間後の心筋homogenateのluficerase活性はそれぞれbackgroundの256±119、44±26、40±8、31±15、13±1倍であった。次にpromoter領域にdeletionを加えたplasmidでは、-658bp、-284bp、-267bp、-72bpで-1110bpに比べそれぞれ61±11、24±5、20±2、0.05±0.01倍のluciferase活性を認めた。SR Ca^<2+>ATPase-luciferaseのin vivo gene tranferにより、心筋のluciferase活性は漸減しつつも少なくとも5週間は有意に認められた。また、SR Ca^<2+>ATPase promoterの-1110bpと-658bpの間にnegative regulatory regionが、-284bpと-72bpの間にpositiveregulatory regionの存在することがわかった。
Small heart muscle cells の muscle cell body (SR) Ca ^ > < 2 + ATPase は, company, zhang period に cytoplasm の Ca ^ 2 + < > を SR within に take り 込 む こ と に よ り company, zhang function に masato and し ま た に accumulation within the SR さ れ て い る Ca ^ 2 + < > quantity が 収 shrinkage period に SR か ら release さ れ る Ca ^ 2 + > < amount を rules す る こ と に よ り 収 The shrinking function is related to に and て に る る る. こ の SRCa ^ > < 2 + ATPase は compensatory 圧 load of heart hypertrophy な ど kind 々 の is not the whole heart muscle に お い て 発 now レ ベ ル が し, SR vesicle あ た り and は 単 a heart muscle weight あ た り の low enzyme activity が す る こ と が know ら れ て い る. I 々 々, in vivo <s:1> is in the field of におけるSR Ca^<2+>ATPase occurrence regulation <s:1> sequence research <e:1>, と <s:1> て, in the field of SRCa^<2+>ATPase gene promoter, を, そ deletion mutant, ラット heart muscle へ, in vivo gene transferによ によ, 検 ask for た. Youdaoplaceholder0 ma 酔 · Respiratory management に thoracotomy 酔, left ventricular apical にSR Ca^<2+>ATPase promoter domain -1110bpまでとluciferase reporter gene <s:1> fusion plasmid 10μgを28 The gauge needle で is injected into the punch た(in vivo gene transfer). After 1 to 5 weeks, the に left ventricular apical cardiac muscle homogenate <s:1> luficerase assayを was performed, and the た index of SRCa^<2+>ATPase promoter activity と と た. Then に, SR Ca^<2+>ATPase Promoter field に deletion を え - 658 bp and 284 bp and 267 bp and 72 bp ま で と し luciferasegene を fusion し た plasmid を, with others in に ラ ッ ト left ventricular heart muscle に injection し に heart muscle after 1 week between を luciferase activity determination Youdaoplaceholder0 た. After 1, 2, 3, 4, and び5 weeks of gene transfer In vivo, the luficerase activity of the homogenate <s:1> in the cardiac muscle それぞれ それぞれbackground <e:1> 256±119, 44±26, 40±8, 31±15, 13±1 times であった. Time に promoter field に deletion を plus え た plasmid で は, 284 bp - 658 bp, -, - 267 bp and bp で - 72-1110 bp に than べ そ れ ぞ れ 61 + 11, 24 + / - 5, 20 + 2, 0.05 + / - 0.01 times の を luciferase activity recognition め た. SR Ca^<2+>ATPase-luciferase in vivo gene tranferによ によ, the activity of luciferase in xinfangus <s:1> gradually decreased <s:1> decreases なくと decreases なくと <s:1> during 5 weeks なくと intentionally に recognized められた. Youdaoplaceholder0, SR Ca^<2+>ATPase promoter between <s:1> -1110bpと-658bp <s:1> にnegative regulatory regionが, -284bpと-72bp <s:1> にpositive atory region する exists する とがわ った った.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Aoyagi T.: "Mapping of the "pressure response element" of SR Ca^<2+>ATPase gene by direct DNA injection into beating rat hearts" Japanese Circulation Journal. (1995)
Aoyagi T.:“通过直接将DNA注射到跳动的大鼠心脏中来绘制SR Ca^2 ATP酶基因的“压力响应元件””日本循环杂志。
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