血液細胞の情報伝達機構におけるチロシンフォスファターゼの解析

酪氨酸磷酸酶在血细胞信息转导机制中的分析

• 批准号: 05857113
• 负责人: 本田 浩章
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857113/
• 关键词: チロシンフォスファターゼ(PTPase); PCR; type-III

我々は、増殖因子(IL-3またはGM-CSF)依存性非白血病細胞株F-36Pから既知のチロシンフォスファターゼ(PTPase)に保存されている領域をプライマーとしてPCRを行い、3種の新規PTPaseDNA(F36-12,F36-14,F36-15)を単離した 。そのうち白血病細胞株及びマウス臓器中で最も発現の多いF36-12を対象として解析を行った。F36-12は胎盤でも発現が見られ、mRNAは約8kbと5.5kbの2種類の転写産物が認められた。胎盤のcDNAライブラリーからF36-12cDNAをプローブとしてスクリーニングを行い、翻訳領域全域を含むと思われる約5kbのクローンを得た。一次構造の解析の結果、F36-12は膜貫通型のPTPaseであり、細胞内に1つのPTPaseドメインを持ち、細胞外領域は10個のファイブロネクチン(FN)類以の繰り返し配列を持つ、いわゆるtype-IIIのPTPaseに属する事が判明した。Type-IIIのPTPaseは現在までHPTPbeta1つが知られているのみで、我々のクローンは第2番目である。大腸菌で発現させたF36-12タンパクを抗原として抗体を作成し、F36-12を発現しているヒト白血病細胞株でウエスタンブロットを行ったところ、220-250KDaのタンパクが確認された。胎盤のcDNAライブラリーから得られた約5kbのF36-12cDNAをCOS細胞にトランスフェクトし同じ抗体でウエスタンブロットを行ったところほぼ同じ大きさのタンパクが確認されたため、得られたcDNAは翻訳領域全域を含んでおり、抗体はF36-12タンパクを特異的に認識している事が明らかとなった。今後、F-36Pの増殖因子からの情報伝達機構におけるF36-12の役割を解析すると共に、F36-12の染色体上の位置を決定し、癌細胞で有意に欠失が見られる部位であるかどうか、また癌化との関連においても検討していく予定である。

I 々 は, raised colonization factor (IL - 3 ま た は gm-csf) dependence of leukemia cell line F - 36 p か ら already know の チ ロ シ ン フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ (PTPase) に save さ れ て い る field を プ ラ イ マ ー と し て PCR を い, three new rules PTPaseDNA の (F36-12, F36-14, F3 6-15)を単 away from た. そ の う ち leukemia cell lines and び マ ウ ス viscera で the most も 発 の now more い F36-12 を like と seaborne し analytical line を っ て た. In the F36-12 <s:1> placenta で で, が was found to be られ, mRNA <s:1> approximately 8kbと5.5kb <e:1>, and two types of <s:1> 転 writing products が identified められた. Placenta の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら F36-12 cDNA を プ ロ ー ブ と し て ス ク リ ー ニ ン グ を い, double 訳 field contains global を む と think わ れ る about 5 KB の ク ロ ー ン を た. A tectonic analytical の の results, F36-12 は transmembrane type の PTPase で あ り に, cell 1 つ の PTPase ド メ イ ン を hold ち, extracellular domain は 10 の フ ァ イ ブ ロ ネ ク チ ン (FN) classes to の Qiao り return し match column を hold つ, い わ ゆ る type - III の PTPase に genus す る matter が.at し た. Type - III の PTPase は now ま で HPTPbeta1 つ が know ら れ て い る の み で, I 々 の ク ロ ー ン は 2 times eye で あ る. Coliform で 発 now さ せ た F36-12 タ ン パ ク を antigen と し て antibody を make し, F36-12 を 発 now し て い る ヒ ト leukemia cell lines で ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト を line っ た と こ ろ, 220-250 kda の タ ン パ ク が confirm さ れ た. Placenta の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら have ら れ た about 5 KB の F36-12 cDNA を COS cell に ト ラ ン ス フ ェ ク ト し with じ antibody で ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト を line っ た と こ ろ ほ ぼ with large じ き さ の タ ン パ ク が confirm さ れ た た め, ら れ た cDNA は turn 訳 field contains global を ん で お り, antibody は F36 - 12 タ ン パ ク を specific に know し て い る matter が Ming ら か と な っ た. In the future, the F - 36 p の raised colonization factor か ら の intelligence 伝 of institutions に お け る F36-12 の existing analytical す cut を る と に, F36-12 の chromosome の position を し, cancer cells で intentionally lost に owe が see ら れ る parts で あ る か ど う か, ま た canceration と の masato even に お い て も beg し 検 て い く designated で あ る.

项目成果

Hiroaki Honda: "Disappearamoe of the ph′chvomosome with an intensive chemotreropy and aetection of the minimal residual diseaseby poymercse chain recotion inapotiet with blast crsis of cmonic mydogenove ;eukemia" International Journal of Hematolgy. 57. 22

Hiroaki Honda：“通过聚合链反应，用强烈的化学治疗和对微小残留病的保护来消除原核细胞，并伴有慢性肌变性白血病的急变危机”《国际血液学杂志》57. 22。