血液細胞の情報伝達機構におけるチロシン脱リン酸化酵素の機能の解析

酪氨酸去磷酸化酶在血细胞信息转导机制中的作用分析

• 批准号: 06857071
• 负责人: 本田 浩章
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857071/
• 关键词: 血液細胞; チロシン脱リン酸化酵素

我々は、増殖因子(IL-3またはGM-CSF)依存性ヒト白血病細胞株F-36Pから既知のチロシンフォスファターゼ(PTPase)に保存されている領域をプライマーとしてPCRを行い、3種の新規PTPase cDNA(F36-12,F36-14,F36-15)を単離した。このうち白血病細胞株及びマウス臓器中で最も発現の多いF36-12を対象として解析を行った。F36-12は胎盤でも発現が見られ、mRNAは約8kbと5.5kbの2種類の転写産物が認められた。胎盤のcDNAライブラリーからF36-12cDNAをプローブとしてスクリーニングを行い、翻訳領域全域を含むと思われる約5kbのクローンを得た。一次構造の解析の結果、F36-12は膜貫通型のPTPaseであり、細胞内に1つのPTPaseドメインを持ち、細胞外領域は10個のファイブロネクチン(FN)類似の繰り返し配列を持つ、いわゆるtype-IIIのPTPaseに属する事が判明し、我々はこの遺伝子をHPTPhと命名した。血液細胞から単離されたtype-IIIPTPaseはHPTPhが始めてであると思われる。大腸菌で発現させたHPTPhタンパクを抗原として抗体を作成し、HPTPhmRNAを発現しているヒト白血病細胞株でウエスタンブロットを行ったところ、220-250KDaのタンパクが認識された。HPTPhcDNAをCOS細胞にトランスフェクトし同じ抗体でウエスタンブロットを行ったところほぼ同じ大きさのタンパクが認識されたため、得られたcDNAは翻訳領域全域を含んでおり、抗体はHPTPhを特異的に認識している事が明らかとなった。また、HPTPhはその細胞外領域に34個のpotencialN-glycosilation siteを持つが、HPTPhタンパクをN-glycosidaseFで処理するとウエスタンブロットでHPTPhの分子量が160KDaに移動する事から、HPTPhタンパクの分子量はN-glycosilationにより修飾されている事が明らかとなった。また、HPTPhのヒト染色体上の遺伝子座位は、癌細胞でしばしば欠失が認められる11番短腕の11p11.2である事が判明した。

We isolated three novel PTase cDNAs (F36 - 12, F36 - 14, F36 - 15) from leukemia cell line F-36P, which was conserved in the domain of IL-3 and GM-CSF. The most common expression of F36 - 12 in leukemia cell lines and organs was detected. F36 - 12 mRNA was found in the placenta, and the mRNA was about 8 kb and 5.5 kb. The placenta cDNA fragment F36 - 12 cDNA fragment was obtained from the cDNA fragment. The results of the analysis of the first structure, F36 - 12 membrane penetration type PTase, intracellular 1 of the PTase gene, extracellular domain 10 of the PTase gene (FN) similar to the sequence, type III PTase belongs to the identification, we have the corresponding gene HPTPh name. The blood cells are separated from each other by type-IIIPTase. The expression of HPTPh mRNA in E. coli was studied. The expression of HPTPh mRNA in E. coli was studied. The expression of HPTPh mRNA in E. coli was studied. HPTPh cDNA is a domain-wide antibody that can be used to detect the presence of HPTPh. HPTPh has 34 potentialN-glycosylation sites in its extracellular domain. HPTPh has a molecular weight of 160 KDa. HPTPh has a molecular weight of 160 KDa. The gene locus on the chromosome of HPTPh was identified in cancer cells.

项目成果

Hiroaki Honda et al.: "Moleaular chning,characterization,and chromasomal locaoizotror of a novel protein-tyrosre phosphatase.HPTPn." Blood. 84. 4186-4194 (1994)

Hiroaki Honda 等人：“一种新型蛋白质酪氨酸磷酸酶的分子加工、表征和染色体定位。HPTPn。”