血液細胞の情報伝達機構におけるチロシン脱リン酸化酵素の機能の解析

点击翻译按钮获取中文摘要

我々は、増殖因子(IL-3またはGM-CSF)依存性ヒト白血病細胞株F-36Pから既知のチロシンフォスファターゼ(PTPase)に保存されている領域をプライマーとしてPCRを行い、3種の新規PTPase cDNA(F36-12,F36-14,F36-15)を単離した。このうち白血病細胞株及びマウス臓器中で最も発現の多いF36-12を対象として解析を行った。F36-12は胎盤でも発現が見られ、mRNAは約8kbと5.5kbの2種類の転写産物が認められた。胎盤のcDNAライブラリーからF36-12cDNAをプローブとしてスクリーニングを行い、翻訳領域全域を含むと思われる約5kbのクローンを得た。一次構造の解析の結果、F36-12は膜貫通型のPTPaseであり、細胞内に1つのPTPaseドメインを持ち、細胞外領域は10個のファイブロネクチン(FN)類似の繰り返し配列を持つ、いわゆるtype-IIIのPTPaseに属する事が判明し、我々はこの遺伝子をHPTPhと命名した。血液細胞から単離されたtype-IIIPTPaseはHPTPhが始めてであると思われる。大腸菌で発現させたHPTPhタンパクを抗原として抗体を作成し、HPTPhmRNAを発現しているヒト白血病細胞株でウエスタンブロットを行ったところ、220-250KDaのタンパクが認識された。HPTPhcDNAをCOS細胞にトランスフェクトし同じ抗体でウエスタンブロットを行ったところほぼ同じ大きさのタンパクが認識されたため、得られたcDNAは翻訳領域全域を含んでおり、抗体はHPTPhを特異的に認識している事が明らかとなった。また、HPTPhはその細胞外領域に34個のpotencialN-glycosilation siteを持つが、HPTPhタンパクをN-glycosidaseFで処理するとウエスタンブロットでHPTPhの分子量が160KDaに移動する事から、HPTPhタンパクの分子量はN-glycosilationにより修飾されている事が明らかとなった。また、HPTPhのヒト染色体上の遺伝子座位は、癌細胞でしばしば欠失が認められる11番短腕の11p11.2である事が判明した。