下垂体、視床下部におけるホルモンによる転写活性変化の細胞単位での検索

逐个细胞寻找激素诱导的垂体和下丘脑转录活性变化

• 批准号: 06770812
• 负责人: 鯉淵 典之
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Dokkyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770812/
• 关键词: 下垂体; 視床下部; 甲状腺; in sitn hybridization; 初代培養; リポソーム; アンチセンス

本研究は、視床下部及び下垂体の遺伝子発現に及ぼすホルモン効果を甲状腺ホルモンの作用を中心として細胞単位で検索することである。本年度は、in situhybridization(ISH)法を用いて、ラット下垂体の初代培養細胞において、甲状腺ホルモン及びTRHがそれぞれ独立してTSHβsubunit遺伝子の発現を調節している事(J.Neuroendo.1994)、また、ラット個体を用いて、ラット視床下部におけるc-erbAα2遺伝子が室傍核のみならず弓状核や腹内側核においても発現していることを報告した(Endocrine J.1995)。ラット以外では、同様にISH法を用いて、成熟期のサケのGnRH遺伝子の発現が一過性の甲状腺ホルモンの分泌上昇と同期して生ずること(Neurosci.Lett.1994)、プロラクチン及びその受容体が、下垂体のみならずヒト脱落膜にも発現し、妊娠の経過に伴い発現が変化することを報告した(日本産婦人科学会誌1994)。続いて、liposomeを用いて細胞内へ遺伝子を導入し、発現調節を解析するための実験系の確立を目指した。まず、発現ベクターをliposome(Lipofectoamine^<TM>)と種々の濃度で混合し、1-24時間までの種々の時間経過で、上記の培養細胞、及びラット個体にtransfectionをおこなった。しかし、培養細胞も、動物個体も、周囲の線維芽細胞やグリア細胞にはかなり良い高率でtransfectするものの、下垂体細胞や神経細胞への導入効率は悪く、満足な結果は得られなかった。そこで、30merの甲状腺ホルモン受容体に対する合成オリゴヌクレオチドを用いて遺伝子導入実験を施行した。その結果下垂体の培養細胞においてc-erbAβ群のアンチセンスを導入したときのみ甲状腺ホルモンの作用を抑制する傾向が観察された。しかし(恐らく導入効率が低いため)その傾向は弱かった。今後、更に20mer程度までオリゴヌクレオチドを短くし、実験を継続することが必要であると思われる。

This study focuses on the development and function of hypothalamus and pituitary gland. This year, the in situ hybridization (ISH) method was used to regulate the expression of TSHβsubunit in primary cultured cells of pituitary gland, thyroid gland and thyroid gland.(J. Neuroendo.1994), c-erbAα2 gene in the lower part of the optic bed, paraventricular nucleus, arcuate nucleus and ventromedial nucleus (Endocrine J. 1995). In addition, the ISH method has been used in the development of GnRH gene in mature stage, transient increase of thyroid secretion and synchronous development (Neurosci.Lett.1994), and the development of GnRH gene and other receptors in mature stage, development of pituitary exfoliation membrane, and development of pregnancy (Journal of Japanese Women's Science Association, 1994). The introduction and regulation of intracellular proteins by liposome are indicated by the establishment of the system. The <TM>concentration of the seed, the time of culture, the time of culture, and the time of individual transfection are mixed, 1-24 hours, respectively. The results of cell culture, cell 30mer Thyroid receptor synthesis and application of the gene introduction process As a result, c-erbAβ-group expression in cultured pituitary cells tends to be inhibited by induction and thyroid function. The tendency of the introduction rate is low. In the future, the 20-mer level will be changed to the short term, and the necessary time will be changed.

项目成果

I.S.Parhar,N.Koibuchi,M.Sakai,M.Iwata,S.Yamaoka: "Gonadotropin-releasing hormone (GnRH):expussion during salmon miyrution" Neuroscience Letters. 172. 15-18 (1994)

I.S.Parhar、N.Koibuchi、M.Sakai、M.Iwata、S.Yamaoka：“促性腺激素释放激素（GnRH）：鲑鱼糜烂期间的排出”神经科学快报。

N.Koibuchi,S.Yamaoka,M.Suzuki,: "In situ hybridization histochemistry of c-erbAα_2 mRNA in the hypothalamus and its surrounding structures in the adult male rat." Endocrine Journal. 42. 49-55 (1995)

N.Koibuchi、S.Yamaoka、M.Suzuki，：“成年雄性大鼠下丘脑及其周围结构中 c-erbAα_2 mRNA 的原位杂交组织化学。” 42. 49-55 (1995)。

N.Koibuchi,H.Ohtake,M.Sakai,Y.Kato,S.Yamaoka: "In situ hybridization detection of TSHβ subunit gou expression in the serum-free primary culture of the adult rat pituitary." Journal of Neuroendocrinology.6. 565-571 (1994)

N.Koibuchi、H.Ohtake、M.Sakai、Y.Kato、S.Yamaoka：“成年大鼠垂体无血清原代培养物中 TSHβ 亚基 gou 表达的原位杂交检测。神经内分泌学杂志”6。 565-571 (1994)

河津 剛,田所 望,鯉淵典之,大竹英樹,熊坂高弘: "ヒト脱落膜におけるプロラクチン(PRL)遺伝子の発現" 日本産婦人科学会雑誌. 46. 1315-1321 (1994)

Tsuyoshi Kawazu、Nozomi Tadokoro、Noriyuki Koibuchi、Hideki Otake、Takahiro Kumasaka：“催乳素 (PRL) 基因在人类蜕膜中的表达”日本妇产科学会杂志 46。1315-1321 (1994)。

田所 望,田中壮一郎,大川浩司,河津 剛,熊坂高弘,鯉淵典之,大竹英樹: "In situ hybridization (ISH)法を用いた、ヒト脱落膜におけるプロラクチン受容体遺伝子発現の解析" 日本産婦人科学会雑誌. 46. 1367-1368 (1994)

Nozomu Tadokoro、Soichiro Tanaka、Koji Okawa、Tsuyoshi Kawazu、Takahiro Kumasaka、Noriyuki Koibuchi、Hideki Otake：“使用原位杂交（ISH）方法分析人类蜕膜中催乳素受体基因的表达”日本妇产科学会杂志46。 1367-1368 (1994)