下垂体、視床下部におけるホルモンによる転写活性変化の細胞単位での検索

逐个细胞寻找激素诱导的垂体和下丘脑转录活性变化

• 批准号: 07770838
• 负责人: 鯉淵 典之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Dokkyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770838/
• 关键词: 甲状腺ホルモン; 下垂体; TSH; α-subunit; 小脳; cytochrome c oxidase; cloning; in situ hybridization

本研究の目的は、下垂体前葉、及び視床下部ニューロンの初代培養系、又は動物個体を用いて、遺伝子発現調節に及ぼすホルモンの作用を、甲状腺ホルモンの作用を中心として細胞単位で解析する事である。本年度は以下のような実験を行った。1)下垂体の初代培養系を用いた実験下垂体糖蛋白ホルモン(LH、FSH及びTSH)間で構造が全く同一のα subunit遺伝子について、それぞれの細胞における遺伝子発現に及ぼす甲状腺ホルモンの作用の違いを調べるため、下垂体の初代培養細胞を用いてα subunitのin situ hybridization (ISH)と、TSG、LH、及びFSHの免疫組織化学を同時に行った。その結果、TSH細胞のみで甲状腺ホルモンによってα subunit遺伝子発現の抑制が観察された。また、TSH分泌のみが甲状腺ホルモンによって抑制され、LH及びFSHの分泌は影響を受けなかった。(投稿準備中)2)視床下部及びその他の中枢神経系に関する実験中枢神経系に関しては当初の目的とやや異なった方向に研究が進んだ。c-erbAα2 mRNAの視床下部における局在を調べている過程(Endocrine J. 1995)で、甲状腺ホルモン受容体及びc-erbAα2遺伝子が中枢神経系のあらゆる部位に広範囲に発現する事がわかった。そこで、視床下部ニューロンばかりではなく、あらゆる神経細胞の遺伝子の発現に対し、甲状腺ホルモンがある種の普遍的な作用を持っているのではないかと考えた。しかし、視床下部はあまりにも多種類の細胞が混在して局在するため、この可能性を調べるためには適さないと考え、発生期の小脳を用いてdifferential plaque screeningにより甲状腺ホルモンによって発現が調節されている遺伝子の検索を行った。その結果、cytochrome c oxidase subunit I遺伝子をクローニングした(J. Neuroendocrinol. 1995)。現在、この遺伝子の発現が、視床下部を含めた脳内のどの部位でその時期に甲状腺ホルモンによって変化するのかをISHを用いて検索中である。

这项研究的目的是使用前垂体前腺和下丘脑神经元的原发性培养系统分析激素对基因表达调节的影响，主要是甲状腺激素的作用，或者在细胞基础上分析基因表达调节。今年，我们进行了以下实验：1）实验性垂体原发性培养系统，用于α亚基基因，具有垂体糖蛋白激素（LH，FSH和TSH）之间具有相同结构的基因，以研究甲状腺激素对每个细胞中的基因表达的作用的差异，并表现出垂体性垂体性垂体性垂体性的原始细胞。结果，仅在TSH细胞中，甲状腺激素观察到了α-亚基基因表达的抑制。此外，甲状腺激素只能抑制TSH分泌，而LH和FSH分泌也没有影响。 （准备帖子）2）下丘脑和其他中枢神经系统研究的实验与中枢神经系统的最初目的略有不同。在研究C-ERBAα2mRNA下丘脑定位的过程中（内分泌J.1995），发现甲状腺激素受体和C-ERBAα2基因在中枢神经系统的所有部分都广泛表达。因此，我们认为甲状腺激素不仅对下丘脑神经元，而且在所有神经元中的基因表达都有一定的普遍影响。但是，由于下丘脑与许多类型的细胞混合在一起，因此不适合检查这种可能性，我们搜索了使用新生小脑使用差异斑块筛查来调节甲状腺激素的表达的基因。结果，克隆了细胞色素C氧化酶亚基I基因（J.Neuroenecocrinol。1995）。当前，ISH正在搜索当时甲状腺激素在包括下丘脑在内的哪些部分，包括下丘脑。

项目成果

S. Tanaka, N. Koibuchi, H. Ohtake, T. Kawatsu, N. Tadokoro, T. Kumasaka, N. Inaba, S. Yamaoka: "Regional comparison of prolactin gene expression in human decidua during pregnancy" European Journal of Endocrinology. (in press). (1996)

S. Tanaka、N. Koibuchi、H. Ohtake、T. Kawatsu、N. Tadokoro、T. Kumasaka、N. Inaba、S. Yamaoka：“怀孕期间人类蜕膜催乳素基因表达的区域比较”《欧洲内分泌学杂志》。

N. Koibuchi, S. Matsuzaki, K. Ichimura, H. Ohtake, S. Yamaoka: "Effect of perinatal hypothyroidism on expression of cytochrome ooxidase subunit I gene which is cloned by differential plaque screening from the cerebellum of newborn rat" Journal of Neuroend

N. Koibuchi、S. Matsuzaki、K. Ichimura、H. Ohtake、S. Yamaoka：“围产期甲状腺功能减退症对通过新生大鼠小脑差异斑块筛选克隆的细胞色素氧化酶亚基 I 基因表达的影响”《Neuroend 杂志》

N. Tadokoro, N. Koibuchi, H. Ohtake, T. Kawatsu, S. Yamaoka, Y. Kato, T. Kumasaka: "Expression of prolactin gene in human decidua studied by in situ hybridization histochemistry" Endocrine Journal. 42. 537-543 (1995)

N. Tadokoro、N. Koibuchi、H. Ohtake、T. Kawatsu、S. Yamaoka、Y. Kato、T. Kumasaka：“通过原位杂交组织化学研究人类蜕膜中催乳素基因的表达”内分泌杂志。

N. Koibuchi, R. Konno, S. Matsuzaki, A. Niwa, S. Yamaoka: "Localization of D-amino-acid oxidase mRNA in the mouse kidney and the effect of testosterone treatment." Histochemistry and Cell Biology. 104. 349-355 (1995)

N. Koibuchi、R​​. Konno、S. Matsuzaki、A. Niwa、S. Yamaoka：“D-氨基酸氧化酶 mRNA 在小鼠肾脏中的定位以及睾酮治疗的效果。”

N. Koibuchi, S. Yamaoka, M. Suzuki: "In situ hybridization histochemistry of c-erbAa2 mRNA in the hypothalamus and its surrounding structures in the adult male rat." Endocrine Journal. 42. 49-55 (1995)

N. Koibuchi、S. Yamaoka、M. Suzuki：“成年雄性大鼠下丘脑及其周围结构中 c-erbAa2 mRNA 的原位杂交组织化学。”