造血障害疾患における膜結合型SCF/c-kit系の解析-骨髄異形成症候群を中心に-

膜结合 SCF/c-kit 系统在造血障碍中的分析 - 关注骨髓增生异常综合征 -

• 批准号: 06770838
• 负责人: 辻野 志穂
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770838/
• 关键词: SCF; transfectant; 液体培養; コロニー形成; 骨髄異形成症候群

Stem cell factor(SCF)は、幼若な造血幹細胞の維持増殖に関与する造血因子である。我々は、すでにこのSCFの受容体であるc-kit陽性細胞存在下でSCFとIL-6が相乗的にマウスの骨髄細胞を長期的に維持、増殖させることを報告しているが、今回、ヒト骨髄細胞を用いて検討した。(1)ヒトSCF遺伝子を導入したtransfectantの作製:Hela細胞のmRNAより3種類のmRNA(whole,membrane-bound,soluble)を分離し、cDNAを作製し、pBCMGneoに組み込んだ。この遺伝子をlipofectin法によりS1/S1マウスの胎児より作成したfibroblastS1/S1 3T3に遺伝子導入してtransfectantを得た。このtransfectantのなかからPCRによりSCF発現の高いクローンを3種(A,B,C)を得た。(2)そのなかのクローンAを用いて、液体培養系での実験を行った。クローンAをconfluentの状態に保ち、この上に正常人およびMDS患者骨髄細胞を一定数播種し、培養した。7日後に全細胞を回収しmethylcellurose法でコロニー形成能を測定した。その結果、MDS5名の内、4名に有意にコロニー形成能の低下をみた。このことは、MDS患者の骨髄では、SCF/c-kit系の伝達系に異常があることを示唆する。今後さらに症例を増やすとともに、再生不良生貧血患者や骨髄増殖性疾患患者の骨髄細胞についての検討を行っていきたい。(3)膜結合型変異遺伝子のtransfectantの作成:上述のcDNAのmutagenesisをおこさせることを試みたが現段階では成功していない。

Stem cell factor(SCF) is related to the maintenance of hematopoietic stem cells. In the presence of c-kit positive cells, SCF and IL-6 are closely related to the maintenance and proliferation of bone marrow cells. (1)The SCF gene was introduced into Hela cells. The three kinds of mRNA(whole,membrane-bound, solution) were isolated, cDNA was produced, and pBCMGneo was assembled. This gene was obtained by lipofectin method and the S1/S1 embryo was made into a fibroblast S1/S1 3T3 and the gene was introduced into the fetus. Three species (A,B,C) were identified by PCR and SCF. (2)A liquid culture system can be used for the treatment of various diseases. A confluent state is maintained, and bone marrow cells from normal individuals and MDS patients are seeded and cultured for a certain number of times. After 7 days, the whole cell was recovered and the methylcellulose method was used to determine the formation energy of the cell. The results, MDS5 inside, 4 inside intentionally, the formation of low energy This is the first time that a patient with MDS has been diagnosed with an abnormal SCF/c-kit system. In the future, there will be an increase in the number of cases, patients with aplastic anemia, and patients with bone proliferative diseases. (3)The method of making the membrane-bound mutant gene is as follows: the mutation of the cDNA is successful in the present stage.