網膜色素上皮細胞に対する網膜内在性増殖因子の解析

视网膜内在生长因子对视网膜色素上皮细胞的影响分析

• 批准号: 06771479
• 负责人: 加藤 圭一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771479/
• 关键词: 網膜色素上皮細胞; 増殖因子

ウシ網膜(300眼)をホモジェナイズ後遠心し、その上清をウシ網膜抽出液として用いた。このウシ網膜抽出液には強い増殖活性があり、高濃度では胎生ニワトリ網膜色素細胞の形態変化を誘発する効果が認められた。増殖因子精製のために、これをまず硫安塩析にて粗分画・濃縮した。35-50%硫安分画を、分子ふるいクロマトグラフィー(Sephadex G-100)にて分画し、分子量約20kD〜65kDの大きさの物質を含む分画を次の段階に用いた。これを更に、DEAE-Sephadex A-25によるイオン交換クロマトグラフィー及びハイドロキシルアパタイトカラムクロマトグラフィーにて蛋白質の精製を試みた。前者にては約0.3〜0.5MNaClにて、後者は約0.4〜0.5MNaCl(pH7.40)にて溶出した分画に最も強い増殖活性が認められた。各段階にての増殖効果は、胎生6日目のニワトリ胚より得た網膜色素上皮細胞を培養し、対象細胞として判定した。順調に精製は進んだが、各段階におけるカラムへの吸着などによる因子量の減少や、その効果判定のために培養という長時間を要する手技を用いるために生ずる、経時的な増殖活性低下のために、これ以上の精製が困難となってしまった。現在、上記の4つの段階において、SDS-PAGEにて約10種類の蛋白質まで精製が行われている。その分子量は約15kD〜25kDであった。今後更なる精製を加えるためには、リソースカラムなどの中性条件下において高分離が可能な逆相高速液体クロマトグラフィーを用いる必要があると考えられる。

The retina (300 eyes) was extracted from the supernatant of the retina. The results showed that there was no significant difference between the two groups. Growth factor purification and purification 35-50% sulfur, molecular weight, molecular weight. The DEAE-Sephadex A-25 is a new type of protein exchange system. The former is about 0.3 ~ 0.5M NaCl, while the latter is about 0.4 ~ 0.5M NaCl (pH 7.40). The dissolution rate of the former is the highest. Each stage of growth and development of the embryo 6 days after birth, the retinal pigment epithelial cells were cultured and determined. In order to improve the quality of the product, it is difficult to determine the quality of the product. Now, the above note 4 levels of protein, SDS-PAGE, about 10 kinds of protein purification and preparation. The molecular weight is about 15kD ~ 25kD. In the future, it is necessary to improve the purification of high temperature liquid under neutral conditions.

项目成果

K.Kato: "Partial purification of a novelendogenous growth factor to embryonic click retinal pigment epithdial cells from bovine retina." Invest Ophthalmol Vis Sci. 35(4). 1760 (1994)

K.Kato：“从牛视网膜中部分纯化胚胎点击视网膜色素上皮细胞的新型内源生长因子。”