網膜色素上皮細胞に対する新しい網膜内在性増殖因子の解析

视网膜色素上皮细胞新的视网膜内在生长因子分析

• 批准号: 07771512
• 负责人: 加藤 圭一
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771512/
• 关键词: 網膜色素上皮細胞; SV40 large T.; 増殖因子

既に単離した、温度感受性SV40largeT抗原遺伝子導入マウス(以下tsSV40と略す)の網膜色素上皮(RPE)細胞及び神経網膜細胞を用いて実験を行った。このRPE細胞(RPET細胞)は温度感受性があり、また、その生存、増殖に同種の神経網膜細胞の培養上清(CM)が必要であった。このCMによる増殖効果は、RPE細胞に対する既知の主要増殖因子では見られず、またこのCMによる増殖効果は非常に劇的であった。このため、CM中のRPET細胞に対する増殖効果を有する因子の精製を試みた。この因子は熱処理および酸処理に対し不安定であったが、トリプシンに対しては安定であった。CMを中性条件下で、逆相高速液体クロマトグラフィーにより分画を試みたが、分画後の各フラクションにては、明らかな増殖効果は消失してしまい、精製が困難であった。また、RPET細胞はラミニン上では形態変化を起こし、細胞は接着性が減少し、円形となり、培養液中に浮遊し増殖した。この浮遊したRPET細胞を、通常の何も塗布していない培養用ディッシュに移すと、細胞は速やかにディッシュ底に接着した。この現象はインテグリンのα6サブユニットの低下による可能性が強く考えられた。実際、免疫組織化学法にてRPET細胞表面にα6サブユニットは認められなかったが、生後2ヶ月の正常マウスのRPE細胞にもα6サブユニットの発現は極めて軽度であり、α6サブユニットの現象によるRPE細胞と視細胞の接着性低下、ひいては網膜剥離の発症との因果関係は明らかにすることは出来なかった。今後、精製に関しては異なったカラムの使用による分画が、また、ラミニンに対する接着性の低下に関しては、免疫組織化学法以外の手法を用いた検討が必要と考えられる。

The expression of SV40 largeT antigen in retinal pigment epithelium (RPE) cells and retinal neurons was studied by PCR. The RPE cells (RPET cells) are essential for the survival, proliferation and culture supernatant (CM) of allogeneic retinal cells. The growth of CM and RPE cells is very important. The RPET gene in the cell culture medium was purified. The heat treatment and acid treatment are unstable. CM under neutral conditions, reverse phase high-speed liquid separation test, separation after each test, bright growth results disappear, refining difficult RPET cells are morphologically transformed, cell adhesion is reduced, cell morphology is increased, and cell proliferation is increased in culture medium. The RPET cells are usually coated with a thin layer of film. This phenomenon is highly probable due to the low level of α6 In fact, immunohistochemical method was used to detect the expression of α6 protein on the surface of RPET cells. The expression of α6 protein on the surface of RPET cells was detected in normal RPE cells at 2 months after birth. The causal relationship between the expression of α6 protein on the surface of RPET cells and the adhesion of RPE cells was analyzed. In the future, it is necessary to investigate the use of methods other than immunohistochemistry

项目成果

加藤圭一: "神経網膜内在性網膜色素上皮細胞増殖因子の部分精製" 日本眼科学会雑誌. 100. 145-149 (1996)

加藤敬一：“神经视网膜内源性视网膜色素上皮细胞生长因子的部分纯化”日本眼科学会杂志100。145-149（1996）。