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各種緑内障眼線維柱組織のcDNAライブラリーの作製とその原因物質のクローニング

各种青光眼眼小梁组织cDNA文库的建立及其致病物质的克隆

基本信息

批准号：
06771492
负责人：
片井直達
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771492/
关键词：
緑内障エラスチン選択的スプライシング RT-PCR

项目摘要

当教室での研究で種々の開放隅角緑内障では、線維柱組織の細胞外基質中に正常組織とは異なるエラスチンタンパク質の増加があることを免疫組織化学的手法により明らかにした。このためエラスチン遺伝子と緑内障眼線維柱組織とのを明らかにすることを本年の研究目標としエラスチン遺伝子の解析を行った。まず正常ヒト線維柱組織のcDNAを作製しλgt11発現ベクターに組み込みライブラリーの作製をおこなった。このライブラリーを使ったβ-ガラクトシダーゼ融合タンパク質の発現実験により,抗ヒトエラスチン抗体と反応するクローンの存在を明らかにした。また,エラスチン特異的プライマーによる線維柱組織とコントロールとしての皮膚組織でのRT-PCRの実験結果では、線維柱組織と皮膚組織ともDNAが増幅できた。ハイブリダイゼイション実験により,線維柱組織にはエラスチン遺伝子が発現していることが明らかになった。このPCR産物の3%アガロース電気泳動により両者に3-4本のメジャーバンドが認められたが、エラスチン遺伝子は選択的スプライシングの違いにより多様なエラスチンタンパク質を産生することが知られており、線維柱組織、皮膚組織では選択的スプライシングの違いにより異なったエラスチンタンパク質が産生されていることが予測された。さらに、緑内障眼線維柱組織のRT-PCRにより、正常眼とは異なったバンドが得られた。現在はどのエクソンのプライシングによるものかを検討中である。

When the classroom was studied, the open corner cataract was observed in the extracellular matrix of the linear column tissue, and the normal tissue was observed in the extracellular matrix. This year's research aims to analyze the cataract eye column tissue. The cDNA of normal line-pillar tissue was produced in the first step of the study. The presence of anti-tumor antibodies and anti-tumor antibodies is clearly demonstrated in the presence of β-cell fusion proteins. The RT-PCR results of the skin tissue and the linear pillar tissue showed that the DNA amplification of the skin tissue and the linear pillar tissue increased. The most important thing is that we have to make sure that we have a clear vision of the future. 3% of the PCR products were produced by electrophoresis, 3-4 of the products were produced by electrophoresis, and 3 - 4 of the products were produced by electrophoresis. The skin tissue is selected from the group consisting of the following components: RT-PCR of cataract eye column tissue and normal eye tissue were obtained. Now we're in the middle of a discussion.